[发明专利]一种抗HER2多克隆抗体

说明书

本发明公开了一种抗HER2的多克隆抗体,所述多克隆抗体通过如下方法制备得到：(1)制备得到HER2抗体，并进行纯化；(2)将前述的HER2抗体作为抗原对动物进行多次免疫，收集动物每次被免疫后的血清样本，(3)将所述各个血清样本进行ELISA效价检测，(4)选择效价大于1:2000K数值的血清样本，进行收集，并进行初步纯化，(5)将初步纯化的血清样本，进一步进行亲和柱层析纯化。本发明的抗Her2多克隆抗体，不仅具有高特异性、高灵敏度，且具有较高的效价，给Her2抗体的检测提供了很好的优质抗体。

技术领域

本发明涉及免疫生物技术领域，具体涉及一种抗Her2抗体及其制备方法。

背景技术

乳腺癌是女性最为常见的恶性肿瘤之一。全世界每年新增100万以上的乳腺癌病例，而且每年近40万人死于乳腺癌。近年来，乳腺癌的发病率在世界范围内呈明显的上升趋势。乳腺癌通常的治疗手段有手术治疗、放化疗和内分泌治疗等等，这些常规治疗手段虽然在很大程度上延长了病人生存期，然而它们副作用很大，其疗效难以进一步提高。肿瘤靶向治疗是近年来兴起的一种新的肿瘤治疗方式，其中具有代表性的是抗肿瘤单克隆抗体。

HER2受体(human epidermal growth factor receptor2人表皮生长因子受体II,)是一种具有酪氨酸激酶活性的跨膜蛋白，由922个腺嘌呤、1,382个胞嘧啶、1,346个鸟嘌呤和880个胸腺嘧啶组成。分子量约为185KD。抗HER2单克隆抗体可以特异性地和HER2分子结合，其抗肿瘤机制包括以下几点:特异结合于HER2受体胞外段从而阻断HER2同源二聚体的组成性激活并干扰HER2与其家族其它成员形成异源二聚体。介导HER2受体的内吞和在溶酶体中的降解；活化PTEN(与tensin同源的磷酸酯酶)阻断PI3K(磷酸肌醇3-激酶)信号通路；调节细胞周期而抑制肿瘤细胞增殖；促进肿瘤细胞凋亡；抗肿瘤血管生成；ADCC(抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用)作用；抑制DNA修复；增加化疗药物的细胞毒性；逆转肿瘤细胞对宿主细胞因子杀伤作用的抵抗等。

HER2受体蛋白一般在胎儿时期表达，成年后会在极少数组织低表达。根据目前研究表明，30％以上的人类肿瘤中存在HER2基因的扩增/过度表达(如乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、输卵管癌、胃癌和前列腺癌等)；其中20％－30％的原发性浸润性乳腺癌有HER2基因的扩增/过度表达。有研究表明HER2的过度表达与肿瘤的发生和侵袭有关，可提高转移的危险。HER2过度表达的乳腺癌患者病情进展迅速，化疗缓解期短，内分泌治疗效果差，无病生存和总生存率低。则以HER2为靶点的治疗性单抗以其高特异性、定向性、安全性和低风险成为了针对Her2阳性乳腺癌的有效治疗方法。而在欧美发达等国家对于重组单抗技术的封锁和垄断，造成进口药物的价格昂贵。这就使得国内患者可选择者性单一或者支付不起。根据调查研究表明，大多数乳腺癌死亡病例(69％)发生在发展中国家。

目前针对HER2引起疾病的疫苗、特异性治疗药物等防控手段尚在研制中。HER2的抗原含量检测、保护性表位研究、治疗性单克隆抗体的制备，具有广泛的应用范围和社会需求。高质量的HER2单克隆抗体(mAb)有可能用于研制治疗性mAb、HER2患者血清学诊断以及HER2的抗原含量的检测，因此具有重要的应用价值。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种用于检测HER2抗体的方法，并提供一种抗HER2的多克隆抗体。

为解决上述技术问题，本发明提供一种抗HER2的多克隆抗体,所述多克隆抗体通过如下方法制备得到：

(1)制备得到HER2抗体，并进行纯化；

(2)将前述的HER2抗体作为抗原对动物进行多次免疫，收集动物每次被免疫后的血清样本，

(3)将所述各个血清样本进行ELISA效价检测，

(4)选择效价大于1:2000K数值的血清样本，进行收集，并进行初步纯化，