[发明专利]一种云锦杜鹃多倍体的培育方法

权利要求书

1.一种云锦杜鹃多倍体的培育方法，其特征在于，包括如下步骤：云锦杜鹃种子灭菌后，以氨磺乐灵进行处理；种子萌发后移栽至育苗块进行培养，然后通过气孔法和流式细胞仪法检测染色体倍性变化，检测确认的染色体加倍植株移栽至温室培养，即可获得多倍体植株；

其中，氨磺乐灵处理云锦杜鹃种子的步骤如下：

用2.5mg·L^-1～10mg·L^-1氨磺乐灵溶液浸泡灭菌后的种子14h～24h，用无菌水清洗3～4次后播种于用无菌水浸湿的灭菌滤纸上，置于玻璃培养皿内萌发，萌发条件为温度24℃～26℃，光照强度1500lx～2000lx，光照时间12h～16h，萌发时间15d～20d；然后将萌发的种子苗移栽至直径3.8cm育苗块，在相同的条件下继续培养30d；

所述移栽的过程包括：将倍性检测确定为多倍体的植株移至光照培养室中培养，培养条件为温度22℃～26℃，湿度75～85％，光照强度2000lx～2500lx，光照时间16h，培养时间3个月～4个月；5月～6月龄植株移至温室，炼苗2d～4d，栽入填有松针土、珍珠岩和黄泥，并且直径为10cm～15cm的花盆内，室内放置3d～5d后，移至室外遮阴棚内；所述松针土、珍珠岩和黄泥的比为4∶2∶1。

2.根据权利要求1所述的云锦杜鹃多倍体的培育方法，其特征在于，所述云锦杜鹃种子灭菌，包括如下步骤：取0.1～0.3g种子，用无菌水清洗1遍，加10mL～20mL，75％酒精浸泡30s；倒去酒精用无菌水清洗3～4次，加入10mL～20mL稀释1000倍的多菌灵溶液浸泡15min～30min；倒去多菌灵溶液用无菌水清洗3～4次，加10mL～20mL 10％安替福明溶液灭菌10min～15min；倒去安替福明溶液用无菌水清洗3～4次，然后以氨磺乐灵进行处理。

3.根据权利要求1所述的云锦杜鹃多倍体的培育方法，其特征在于，所述气孔法和流式细胞仪法检测染色体倍性变化包括如下步骤：剪取植株嫩叶，用10％安替福明浸泡16h～24h，撕取叶片下表皮，在光学显微镜下统计单位面积气孔数量、测定气孔大小；取同一植株叶片，提取细胞核，通过流式细胞仪测定植株倍性，染色体加倍植株即为多倍体。