[发明专利]一株地衣芽孢杆菌及其在防治葡萄根腐病中的应用

说明书

本发明公开了一株地衣芽孢杆菌及其在防治葡萄根腐病中的应用。该菌株为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)08220414，保藏编号为CGMCC No.15216。实验表明，本发明的地衣芽孢杆菌菌株08220414具有生长速度快、产孢量大、耐盐碱性强、防治葡萄根腐病效果好，在葡萄根际能够快速大量定殖等特点，因此具有良好的应用前景。由该地衣芽孢杆菌08220414制备的生物防治制剂，可以作为生物农药或生物肥料，防治葡萄根腐病防治效果高达90％以上。

技术领域

本发明属于植物病害生物防治技术领域。具体而言，本发明涉及一株地衣芽孢杆菌及其在防治葡萄根腐病中的应用，以及采用该地衣芽孢杆菌制备的生物防治制剂。

背景技术

葡萄根腐病，又称葡萄圆斑根腐病。葡萄根开始萌动后即受此病危害，一般从植株须根发病，使病根变褐腐烂，逐渐蔓延到肉质侧根，并围绕须根基部形成一个红褐色圆斑，病斑不断扩大，常腐烂达木质部，且数斑融合在一起，使皮层极易与木质部分离，病根逐渐变成黑褐色而死亡。由于植物本身愈伤能力强，病根死后还会萌发出新根，致使病害此起彼伏。通常葡萄植株根部发病后地上部萌发推迟，萌发后的部分枝条或全株生长也较衰弱，叶小而色淡；根部发病严重时，新梢4～7片叶会突然枯萎，以后干枯死亡。

葡萄根腐病主要由三种病原菌引起，分别为腐皮镰刀菌、尖孢镰刀菌和弯角镰刀菌。这几种镰刀菌都是土壤习居菌，在土壤中腐生，地下害虫、带菌的土壤、园艺工具均可带病传播。对葡萄根腐病的防治，采用的常规方法包括传统的化学防治、培育抗病品种以及生物防治。化学防治如波尔多液，使用不当会导致铜离子毒害或石灰药害，降低果实品质和产量；而抗病品种培育周期长，抗性单一，投入大；生物防治主要是利用有益的微生物，通过生物间的竞争作用、抗菌作用、重寄生作用、交叉保护作用及诱发抗病性等来抑制某些病原菌的存活和活动，具有无毒、无污染、不产生抗药性、高效的优点，表现出广阔的应用前景。

地衣芽孢杆菌是一种革兰氏阳性杆状细菌，可产生内生芽孢，耐热抗逆性强，在土壤和植物表面普遍存在。地衣芽孢杆菌是植物体内常见的一种内生菌，对人畜无毒无害，不污染环境。生长速度快，营养需求简单，在植物的表面易于存活、定殖与繁殖，生产工艺简单，制剂稳定，使用方便，储存期长。地衣芽孢杆菌对植物病菌的作用机制和方式是多样的。主要包括竞争作用、抗生作用、溶菌作用和促进植物生长等几方面。因此是一种理想的生防微生物。

发明内容

本发明的目的是提供一株用于高效防治葡萄根腐病的新的微生物——地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)菌株08220414。本发明的地衣芽孢杆菌菌株具有生长速度快、产量大、耐盐碱性强，在植物表面能够快速大量定殖等特点，因此具有良好的应用前景。

本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的：本发明所提供的菌株为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)08220414，是从山东省莱州市三山岛盐碱地土壤中分离获得的，已于2018年1月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏号为CGMCCNo.15216。

本发明地衣芽孢杆菌08220414的培养方法或繁殖方法包括：

(1)普通培养保存采用LB培养基，配方为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，琼脂15～20g，蒸馏水1000mL，pH调至7.0～7.2。

(2)实验室液体培养采用LB液体培养基，配方为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，蒸馏水1000mL，pH调至7.0～7.2。

(3)种子液培养基配方：按质量百分比计，豆饼粉3.00％，玉米粉4.00％，葡萄糖0.40％，鱼粉0.50％，磷酸二氢钾0.03％，轻质碳酸钙1.20％，硫酸铵0.30％，氯化钠0.10％，剩余为水，pH调至7.0-7.2。