[发明专利]一种3E6单抗腹水包被ELISA板的试剂盒的建立方法

说明书

本发明公开了一种3E6单抗腹水包被ELISA板的试剂盒的建立方法，包括以下步骤：应用方阵法确定3E6单抗腹水包被ELISA板浓度，37℃ 2小时，弃液体PBST洗3次；5%的脱脂奶粉300ul 37℃ 1小时，PBST洗3次；加小反刍兽疫Nigera75/1细胞毒（1:8），37℃ 1小时，PBST洗3次；加兔抗V蛋白血清1:100，同时设VERO细胞上清做对照，37℃ 45min，PBST洗3次；加兔二抗稀释浓度1:10000，100ul/孔，25℃ 45min，PBST洗3次；加TMB显色液100ul/孔，25℃ 3‑5min；2M硫酸终止液100ul/孔，450nm测ELISA OD值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种3E6单抗腹水包被ELISA板的试剂盒的建立方法。

背景技术

目前国内应用“小反刍兽疫通用型实时银光RT-PCR检测试剂盒”进行小反刍兽疫病毒检测。该方法对样品RNA的提取要求严格，避免污染；试剂盒某一组分污染，整个试剂盒不能用；该试剂盒不能反复冻融，必须在三次用完。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的缺陷，提供一种3E6单抗腹水包被ELISA板的试剂盒的建立方法。

其具体技术方案为：

一种3E6单抗腹水包被ELISA板的试剂盒的建立方法，包括以下步骤：

⑴应用方阵法确定3E6单抗腹水包被ELISA板浓度为0.5ul:2ml，37℃包被2小时，弃去液体PBST洗涤3次，3min/次。

⑵5％的脱脂奶粉300ul 37℃封闭1小时，弃去封闭液PBST洗涤3次，3min/次。

⑶加小反刍兽疫Nigera75/1细胞毒，筛选检测的最终浓度是1:8(细胞毒浓缩后的稀释度)，37度1小时，弃去液体PBST洗涤3次，3min/次。

⑷加兔抗V蛋白血清1:100，同时设VERO细胞上清做对照，37℃作用45min，弃去血清PBST洗涤3次，3min/次。

⑸加抗兔二抗稀释浓度1:10000，100ul/孔，25℃作用45min，弃去液体PBST洗涤3次，3min/次。

⑹加TMB显色液100ul/孔，25℃作用3-5min。

⑺2M硫酸终止液100ul/孔，450nm测定ELISAOD值。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

本发明试验与相关报道的关键不同点就是表达了小反刍兽疫Nigero75/1疫苗毒的V蛋白，制备了单抗。本发明具有较高的专一性和特异性，适合推广应用。

附图说明

图1是3E6单抗腹水包被ELISA板的试剂盒的建立方法的流程图；

图2是单抗建立的夹心ELISA检测的结果。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明的技术方案作进一步详细地说明。

如图1所示，一种3E6单抗腹水包被ELISA板的试剂盒的建立方法，包括以下步骤：

⑴应用方阵法确定3E6单抗腹水包被ELISA板浓度为0.5ul:2ml，37℃包被2小时，弃去液体PBST洗涤3次，3min/次。

⑵5％的脱脂奶粉300ul 37℃封闭1小时，弃去封闭液PBST洗涤3次，3min/次。

⑶加小反刍兽疫Nigera75/1细胞毒，筛选检测的最终浓度是1:8(细胞毒浓缩后的稀释度)，37℃1小时，弃去液体PBST洗涤3次，3min/次。