[发明专利]一种百合皂苷单体的分离纯化方法

说明书

本发明提供一种百合皂苷单体的分离纯化方法。本发明以百合干燥肉质鳞叶为原料，经特定浓度的乙醇提取，大孔吸附树脂进行粗分，然后在高效液相色谱仪监控的条件下，以Sephadex LH‑20凝胶色谱柱细分，最后经过反向硅胶色谱柱纯化，得到三个单体化合物。本发明通过最适宜的工艺及参数条件的组合，可有效除去百合中的大量杂质，一次性可获取多个的已知活性的百合皂苷，从而可为皂苷类化合物的活性研究和单一成分的新药开发提供物质基础。

技术领域

本发明涉及中药活性成分的分离提纯技术领域，尤其涉及一种百合皂苷单体的分离纯化方法。

背景技术

百合在全国分布广泛，该味药性味甘寒，具有养阴清肺、清心安神的功效，用于治疗阴虚久咳、痰中带血、惊悸、虚烦、失眠多梦及精神恍惚等症，为药食兼用之品。据《本草纲目》记载，百合具有补益心肺、固肾、补脑、清心、安神、清润肺燥、调理脾胃、益气调中、清热止咳、养阴止血和消暑等功效。百合主要含有甾体皂苷、生物碱类、酚酸甘油酯、磷脂、多糖、氨基酸和类黄酮等成分。其中，甾体皂苷类化合物是其主要活性成分，具有抗抑郁、抗氧化、抗炎、抗癌等生物活性。为了揭示以皂苷类化合物为主要活性成分的中药治疗疾病的物质基础，并充分利用百合甾体皂苷类单体化合物的药理活性，需要将百合皂苷的单体进行分离纯化，但是百合中存在大量结构相似的皂苷类化合物使得甾体类皂苷单体化合物的分离十分困难，且皂苷类化合物一般只在紫外末端有吸收，这给利用高效液相色谱在线检测皂苷化合物带来了困难，因此，如何实现对百合中皂苷单体的分离纯化一直是困扰研发人员的难题。

发明内容

针对现有分离提取方法无法实现对百合皂苷单体的分离纯化的问题，本发明提供一种百合皂苷单体的分离纯化方法。

本发明中所述百合为百合是指百合科植物卷丹、百合或细叶百合，药材部位为干燥肉质鳞叶。

为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案是：

一种百合皂苷单体的分离纯化方法，包括以下步骤：

步骤一、将百合鳞叶的提取物加入填充有非极性大孔吸附树脂的层析柱中，分别用3～5个柱体积的水、体积浓度为8～12％的乙醇溶液和体积浓度为38～41％的乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，然后以3～5个柱体积的体积浓度为79～82％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，蒸干，得干浸膏；

步骤二、将所述干浸膏加入装有Sephadex LH-20的凝胶色谱柱中，用体积浓度为49～53％甲醇溶液或乙醇溶液洗脱，并以高效液相色谱进行检测监控，以主要峰的紫外吸收峰值作为分段依据，紫外吸收值低于5毫安的计入下一部分，得到5个组分，按照收集的时间顺序记为组分1，组分2，组分3，组分4，组分5；

步骤三、将所述组分3、组分4和组分5分别纯化，得3种对应的单体化合物。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

百合中除含有皂苷外，还含有糖类、黄酮类、生物碱类、微量元素等非常复杂的成分，较难实现百合皂苷与其他物质的分离，且百合中皂苷的含量很低，结构及理化性质很相似，很难通过简单的分离方法一次获得多个百合皂苷的单体。本发明提供的百合皂苷单体分离纯化的方法，针对百合中存在的各组分的理化性质，通过上述步骤一至步骤三的顺序搭配，以及适当参数的组合，有效除去百合中的大量杂质，获得纯度较高的百合皂苷单体。通过本发明提供的百合皂苷单体的分离纯化方法，可以实现百合皂苷的目标制备，一次性可获取多个的已知活性的百合皂苷，同时富集分离微量皂苷，从而可以不断丰富皂苷库，为皂苷类化合物的活性研究和单一成分的新药开发提供物质基础。

优选的，步骤一中，所述百合鳞叶的提取物由如下方法制得：将百合鳞叶粉碎，加入鳞叶4～5倍体积的体积浓度为65～70％的乙醇溶液，加热回流提取2～3次，减压浓缩，干燥，得百合鳞叶的提取物。

通过上述提取方法可以将百合鳞叶中的大量杂质去除，确保提取物中主要含有皂苷、黄酮等成分。