[发明专利]有效鉴别不同种类中华鳖的分析检测方法

说明书

本发明公开了一种有效鉴别不同种类中华鳖的分析检测方法，包括以下步骤：取待测中华鳖的肌肉组织碾磨均匀后加入二氯甲烷‑甲醇混合提取溶液作为提取液；将提取液进行超声辅助提取后加入超纯水再冷冻离心；在冷冻离心所得的首次水相中加入二氯甲烷进行二次提取，将冷冻离心所得的首次有机相以及二次提取获得的二次有机相进行合并，得萃取液；将萃取液放置在氮吹仪下吹干，用乙腈定容，过0.22μm有机滤膜，作为待测液；将待测液通过液相色谱质谱法进行分析检测，利用m/z790,816,818和866的磷脂离子作为潜在标记物用于中华鳖种类鉴别。采用该方法能有效区分浙乌二号、清溪乌鳖、浙新花鳖这三种中华鳖。

技术领域

本发明涉及建立一种分析鳖体内磷脂的脂质组学方法，特别是利用这种方法对不同种类的中华鳖和其是否掺假进行有效鉴别。

背景技术

中华鳖是一种高价值的商业物种，在中国、日本、韩国等亚洲国家，常被作为中药补品和食物进行食用。中华鳖中含有蛋白质、必需氨基酸、多不饱和脂肪酸、微量元素和其他活性物质等营养因素，可以提高人体免疫力，促进新陈代谢，预防糖尿病、贫血等。近年来，通过杂交育种得到了几种新品系中华鳖，预计将取代目前未改良的品种。然而在市场上，这些高价值的中华鳖及其加工产品被廉价甚至劣质的肉取代，以牟取商家的经济利益。由于它们外形相似，这种欺骗手段很难通过中华鳖的外部特征和解剖特征来识别，而且当其被处理加工后会进一步增加其识别的难度。因此，相关部门需要一种有效可靠的方法对中华鳖类别进行分析检测以保障消费者的食品安全。

目前对中华鳖种类的鉴定方法大多为聚合酶链式反应(PCR)、限制性片段长度多态性聚合酶链式反应(CAPs)、多功能靶向蛋白质组学等基因型方法。然而常用的这些方法耗时长且较为昂贵，而且当分析物较为复杂或者存在DNA污染时分析检测会受到较大的限制。此外，当所研究的物种不存在于数据库中时，需要特定的探针序列和相关的DNA测序，这使得物种鉴定的基因型方法在技术上的要求较为苛刻。

随着样品的复杂性增加，中华鳖种类鉴定需要具有高灵敏度、高选择性和较大检测范围的强大分析仪器。

浙乌二号、清溪乌鳖、浙新花鳖这三种中华鳖品系相近、外形相似，较难从肉眼上进行区分，因此急需开发能对其进行有效区分的方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种有效鉴别不同种类中华鳖的分析检测方法。该方法具有高分辨率、高灵敏度、快速、可靠、经济的特点；能对浙乌二号、清溪乌鳖、浙新花鳖这三种中华鳖品系进行有效鉴定。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种有效鉴别不同种类中华鳖的分析检测方法，包括以下步骤：

1)、取待测中华鳖的肌肉组织0.2g，碾磨均匀后加入1.2±0.1mL二氯甲烷-甲醇混合提取溶液，于30±5℃振荡均匀(振荡时间约为5±1分钟)，得提取液(A品)；

所述二氯甲烷-甲醇混合提取溶液中，二氯甲烷：甲醇＝1.9～2.1：1(优先2：1)的体积比(v/v)；

2)、将提取液(A品)进行超声辅助提取后，加入0.8±0.1mL的超纯水，并将其冷冻后离心；

3)、在步骤2)冷冻离心所得的首次水相(上层)中加入2±0.2mL二氯甲烷进行二次提取，获得位于上层的二次水相和位于下层的二次有机相层；

4)、步骤2)冷冻离心所得的首次有机相(下层)以及步骤3)二次提取获得的二次有机相进行合并，得萃取液；

将萃取液放置在氮吹仪下吹干，用1mL的乙腈定容，过0.22μm有机滤膜，作为待测液；

5)、将待测液通过液相色谱质谱法(液相色谱和质谱联用的方法)进行分析检测，利用m/z790,816,818和866的磷脂离子作为潜在标记物用于中华鳖种类鉴别。

作为本发明的有效鉴别不同种类中华鳖的分析检测方法的改进：步骤5)中，