[发明专利]介入法建立犬自体血栓栓塞性脑梗死溶栓后颅内出血转化模型及其应用

说明书

本发明涉及一种介入法建立犬自体血栓栓塞性脑梗死溶栓后颅内出血转化模型及其应用。包括如下步骤：血栓的制备、脑梗死模型的制备、溶栓以及出血结果的判定。本发明犬出血转化模型具有以下优点：其一、比格犬的大脑结构与人类相似，脑血管直径变异不大，相较于鼠等小动物，相关的实验结果可以实现更好的临床转化。其二、在小动物实验中，多使用激光多普勒血流仪来监测脑血流的变化，从而判断血管的闭塞和再通；而DSA作为临床判断血流是否通畅的金标准，可以指导血栓的注射，进行精准的栓塞，且提供了溶栓是否有效的直接证据。其三、介入手术作为一项微创技术，可以最大限度地减少其他一些不必要的操作损伤，从而提高实验结果的准确性和可靠性。

技术领域

本发明属于基础医学技术领域，具体涉及一种介入法建立犬自体血栓栓塞性脑梗死溶栓后颅内出血转化模型及其应用。

背景技术

近年来，急性脑梗死严重影响人类的健康，且脑梗死后约10～40％的患者会自然转化形成颅内出血，进一步加重其致死率和致残率。随着静脉注射组织型纤维蛋白酶原激活剂(rtPA)和经血管腔内取栓治疗急性脑梗死在临床应用中的逐渐增多，这些治疗方法在恢复缺血脑组织血流灌注的同时，也增加了颅内出血转化发生的比例。特别是在溶栓治疗中，如果恢复缺血脑组织血流灌注的时间超过4.5h，其颅内出血转化比例会显著性增加。

颅内出血转化可以是无症状的，但是是影响脑梗死预后的独立危险因素，会导致患者死亡率和致残率明显增高。因此，深入了解脑梗死溶栓后颅内出血转化的机制并进行相应的干预，对于改善脑梗死患者预后极为重要。目前关于脑梗死溶栓后颅内出血相关性的实验研究已经取得了部分进展，但是均以鼠等小动物作为实验动物，由于小动物解剖结构和人体的明显差异，且造模方法与人体发病机制的不同，相关实验结果无法实现有效的临床转化。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明旨在提供一种介入法建立犬自体血栓栓塞性脑梗死溶栓后颅内出血转化模型。基于犬的脑血管及脑实质的结构与人类较类似，其靶器官较大，从而能够更好的模拟人体疾病的发生与发展。

为此，本发明提供如下技术方案：

第一方面，本发明提供一种犬自体血栓栓塞性脑梗死溶栓后颅内出血转化模型的建立方法，包括如下步骤：S1：血栓的制备：以犬作为实验动物，于双侧腹股沟区备皮后消毒铺巾，穿刺左侧股静脉置入鞘管用于静脉抽血制作血栓；S2：脑梗死模型的制备：穿刺右侧股动脉置入导管鞘，经股动脉鞘管引入椎动脉导管进行系统的脑血管造影评估；之后依次将血栓注入大脑中动脉，待全脑血管造影证实大脑中动脉完全闭塞时，将导管连接加压生理盐水，堵塞同侧颈内动脉2h；S3：溶栓：于脑卒中后4.5h通过静脉给予重组组织型纤溶酶原激活物rtPA，给药剂量为2mg/kg，首次静脉推注10％负荷量，剩余90％的静脉维持60min，之后重复造影观察血管是否再通；S4：出血结果的判定：采用CT扫描、大体病理和HE染色判断是否有颅内出血转化的发生。优选地，以比格犬作为实验动物。

优选地，S1中，血栓的制备具体包括：S101：抽取犬自体静脉血，离心处理后取上层血浆；S102：在上层血浆中加入含100单位凝血酶的生理盐水，混合均匀后立即注入导引导管中；S103：每条犬经股静脉给以2500单位肝素，并以生理盐水静滴注维持静脉通路，1.5～2.5h后将凝固及析出水分的血栓从导管中取出，置入生理盐水中反复漂洗，之后用吸水纱布吸干；S104：制作血栓条，并修剪为预设大小，之后将血栓条置于装有生理盐水的无菌器皿中，备用。

优选地，S101中：离心处理的条件包括：温度为3～5℃，转速为3500～4500rpm，时间为5～10min；静脉血的抽取量与含100单位凝血酶的生理盐水的体积比为(5～10)：1。

优选地，离心处理的条件为：温度为4℃，转速为4000rpm，时间为10min；静脉血的抽取量与含100单位凝血酶的生理盐水的体积比为8：1。