[发明专利]人体细胞全形态免疫荧光染色方法及试剂盒

权利要求书

1.一种人体细胞全形态直接免疫荧光染色方法，包括以下步骤：

(1)提供和/或制备细胞特征性的荧光细胞学检测试剂，包括细胞固定液、细胞封闭液、洗涤液、稀释液、细胞膜与细胞核膜通透液、细胞核仁标志物的抗体荧光标记物、细胞核浆标志物的抗体荧光标记物、细胞膜和细胞浆抗原标志物的抗体荧光标记物、细胞核荧光染料；

(2)配制 抗体结合反应液：用稀释液分别稀释细胞核仁标志物的抗体荧光标记物、细胞核浆标志物的抗体荧光标记物、细胞膜和细胞浆抗原标志物的抗体荧光标记物，形成各抗体结合反应液；

(3)制备人体细胞标本检测片；

(4)用细胞固定液固定细胞，10-50分钟；用洗涤液清洗1-3次；

(5)用细胞膜与细胞核膜通透液与细胞标本检测片温育5-60分钟，弃净液体；

(6)用细胞封闭液封闭10-120分钟，弃净液体；

(7)加入步骤(2)中的各抗体结合反应液，染色30-90分钟、弃净液体，用洗涤液清洗1-3次；

(8)用细胞核荧光染料复染5-30分钟；

(9)用洗涤液轻微清洗细胞样本检测片2-5次；

(10)晾干待检。

2.一种人体细胞全形态间接免疫荧光染色方法，包括以下步骤：

(1)提供和/或制备细胞特征性的荧光细胞学检测试剂，包括细胞固定液、细胞封闭液、洗涤液、稀释液、细胞膜与细胞核膜通透液、非标记的细胞核仁标志物的抗体、标记的细胞核浆标志物的抗体、标记的细胞膜和细胞浆抗原标志物的抗体、荧光标记的第二抗体、细胞核荧光染料；

(2)配制抗体结合反应液：用稀释液分别稀释非标记的细胞核仁标志物的抗体、标记的细胞核浆标志物的抗体、标记的细胞膜和细胞浆抗原标志物的抗体、荧光标记的第二抗体，形成各抗体结合反应液；

(3)制备人体细胞标本检测片；

(4)用细胞固定液固定细胞，10-50分钟；用洗涤液清洗1-3次；

(5)用细胞膜与细胞核膜通透液与细胞标本检测片温育5-60分钟，弃净液体；

(6)用细胞封闭液封闭10-120分钟，弃净液体；

(7)先加入步骤(2)中的非标记的细胞核仁标志物的抗体、标记的细胞核浆标志物的抗体、标记的细胞膜和细胞浆抗原标志物的抗体结合反应液，染色30-90分钟、弃净液体，用洗涤液清洗1-3次；再加入步骤(2)中的荧光标记的第二抗体结合反应液，染色20-60分钟，弃净液体，用洗涤液清洗1-3次；

(8)用细胞核荧光染料复染5-30分钟；

(9)用洗涤液轻微清洗细胞样本检测片2-5次；

(10)晾干待检。

3.根据权利要求1或2所述的免疫荧光染色方法，其中细胞固定液为甲醇、丙酮或多聚甲醛。

4.根据权利要求1或2所述的免疫荧光染色方法，其中细胞封闭液为含0.5-10.0％BSA或小牛血清的pH7.2-7.4PBS。

5.根据权利要求1或2所述的免疫荧光染色方法，其中洗涤液为含0.1-1.0％吐温-20的pH7.2-7.4PBS。

6.根据权利要求1或2所述的免疫荧光染色方法，其中稀释液为含0.1-1.5％BSA或小牛血清的pH7.2-7.4PBS。

7.根据权利要求1或2所述的免疫荧光染色方法，其中细胞膜与细胞核膜通透液为曲拉通X-100。

8.根据权利要求1或2所述的免疫荧光染色方法，其中细胞核荧光染料为DAPI。

9.一种人体细胞全形态直接免疫荧光染色试剂盒，包括细胞固定液、细胞封闭液、洗涤液、稀释液、细胞膜与细胞核膜通透液、细胞核仁标志物的抗体荧光标记物、细胞核浆标志物的抗体荧光标记物、细胞膜和细胞浆抗原标志物的抗体荧光标记物和细胞核荧光染料。

10.一种人体细胞全形态间接免疫荧光染色试剂盒，包括细胞固定液、细胞封闭液、洗涤液、稀释液、细胞膜与细胞核膜通透液、非标记的细胞核仁标志物的抗体；非标记的细胞核浆标志物的抗体；非标记细胞膜和细胞浆抗原标志物的抗体、荧光标记的第二抗体、细胞核荧光染料。