[发明专利]一种真菌检测试剂盒

说明书

本发明涉及一种显色法真菌1,3‑β‑D‑葡聚糖检测试剂盒，所述试剂盒包括反应主剂、主剂复溶液、样本处理液、多肽显色基质、显色液A、显色液B、多肽显色基质溶解液、显色液A溶解液以及显色液B溶解液，所述显色液A的原料选自1‑萘酚‑4‑磺酸钠、1‑萘酚‑2‑磺酸钠和1‑萘酚‑5‑磺酸钠中的一种或多种。本发明提供的试剂盒操作简便，灵敏度高，检测浓度范围广。

技术领域

本发明涉及一种试剂盒，具体涉及一种检测真菌1,3-β-D-葡聚糖的试剂盒。

背景技术

随着抗生素、免疫抑制剂和皮质类固醇激素在临床的广泛使用，临床中发生深部真菌感染(invasive fungal infections，IFI)的机会也越来越多，而且深部真菌感染患者的死亡率近年来仍是居高不下，原因之一就是深部真菌感染的早期诊断困难，而传统的诊断方法通常周期长，敏感性差，且组织病理学检查和深部组织培养对于危重患者并不适用。

内毒素(endotoxin)是存在于革兰氏阴性细菌细胞壁外膜中的脂多糖(LPS)。在临床诊断中，血浆内毒素水平的测定主要用于革兰氏阴性细菌感染的诊断、治疗效果的确定以及治疗革兰氏阴性细菌感染的预后、早期诊断等。已知内毒素为有效的热原，因此内毒素的检测在注射药物中是极为重要的。在美国，日本和其它国家的药典中已经描述了内毒素的测试方法。内毒素被认为是革兰氏阴性细菌感染休克的主要原因。

β-葡聚糖存在于天然谷物中，细菌和真菌的细胞壁中包含一组β-D-葡聚糖多糖。根据来源不同，这些葡聚糖具有显著不同的物理化学性质。通常β-葡聚糖形成具有1-3个β-糖苷键的线性骨架，但其在分子量、溶解度、粘度、分支结构和凝胶化性质方面的变化会在动物中引起多种生理作用。

β-葡聚糖广泛存在于真菌细胞壁中，占其干燥重量的80％-90％。其中1-3-β-D葡聚糖占真菌壁成分50％以上，尤其在酵母样真菌中其含量可更高，其形式以糖苷键连接的葡萄糖残基骨架作为主链，分支状1-6-β-D葡糖糖残基作为侧链。由于1-3-β-D葡聚糖广泛存在于真菌的细胞壁中，当真菌进入人体血液或深部组织后，经吞噬细胞的吞噬、消化等处理后，1-3-β-D葡聚糖可从胞壁中释放出来，从而使血液及其他体液(如尿、脑脊液，腹水，胸水等)中1-3-β-D葡聚糖含量增高。当真菌在体内含量减少时，机体免疫可迅速清除1-3-β-D葡聚糖。因此，在临床诊断中，血浆或血清中β-葡聚糖水平的测定被用于早期诊断真菌感染，并且确定治疗效果和预后。

显色法真菌1,3-β-D-葡聚糖检测试剂盒的检测原理为：革兰氏阴性细菌内毒素能特异性地激活鲎血细胞中G因子，被激活的酶水解显色基质释放出显色基团，显色基团与显色液在高碘酸钠存在下生成蓝色缩和物，蓝色缩合物在675nm波长处的吸光度与内毒素浓度在一定范围内成线性关系，所以通过检测该波长下经处理后的检测样本的吸光度可确定该样本中内毒素的含量。

目前市面上销售的真菌检测试剂盒大多操作繁琐，检测步骤线路长，引入干扰物的几率大，导致检测时间较长，灵敏度较差，检测浓度范围较窄。因此，亟需一种操作简单，灵敏度好，可适应各类检测浓度的真菌检测试剂盒。

发明内容

为解决现有技术中存在的上述问题，本发明提供一种显色法真菌1,3-β-D-葡聚糖检测试剂盒，所述试剂盒包括反应主剂、主剂复溶液、样本处理液、多肽显色基质、显色液A、显色液B、多肽显色基质溶解液、显色液A溶解液以及显色液B溶解液。

优选的，所述反应主剂以鲎血细胞为主要原料。

优选的，所述主剂复溶液包括Tris-HCl和MgCl₂溶液。

优选的，所述样本处理液包括KOH和KCl的水溶液。

优选的，所述多肽显色基质的原料为Boc-Thr-Gly-Arg-DEA(N,N’-二乙基苯胺)。