[发明专利]一种C反应蛋白检测试剂及SERS检测方法

说明书

本发明属于生物分析化学领域，公开了一种C反应蛋白检测试剂及SERS检测方法。所述检测试剂由巯基化CRP适配体修饰的Au‑NNPs探针和氨基化CRP适配体修饰的AgMNPs磁性捕获基底构成。当CRP存在时，Au‑NNPs探针和AgMNPs磁性捕获基底会通过适配体的特异性识别作用结合在一起形成三明治夹心结构，随着CRP浓度的改变，磁分离后将得到的CRP样品的拉曼光谱特征峰的强度值代入“拉曼强度与CRP浓度的线性曲线”，计算可得CRP的浓度。此方法具有信号稳定，超灵敏性，高选择性等优点，所得检测试剂及方法在临床分析诊断中具有重要应用价值。

技术领域

本发明属于生物分析化学领域，具体涉及一种C反应蛋白检测试剂及SERS检测方法。

背景技术

疾病生物标志物一般是可供客观测定和评价的一个普通生理或病理或治疗过程中的某种特征性的生化指标，通过对它的测定可以获知机体当前所处的生物学过程中的进程。检查一种疾病特异性的生物标志物，对于疾病的鉴定、早期诊断及预防、治疗过程中的监控可起到帮助作用。

C反应蛋白(CRP)是一种五聚体蛋白，分子量大约为115KD。CRP由肝细胞所合成，具有激活补体和促进粒细胞及巨噬细胞的吞噬作用。

传统观点认为CRP是一种非特异的炎症标志物，但近十年的研究揭示了CRP直接参与了炎症与动脉粥样硬化等心血管疾病，并且是心血管疾病最强有力的预示因子与危险因子。它是一种通用的炎症生物标志物，可用于诊断癌症，心血管疾病和癌症中的炎症反应。正常健康受试者的基础CRP水平低于10mg/L(～87nM)。然而，已发现血清CRP水平高于3mg/L(～26nM)时与心血管事件的延长风险相关。1-3mg/L的水平与心血管事件的中等风险相关，而低于1mg/L(～8.7nM)的水平表示低风险。因此，CRP的检测对炎症等疾病的早期诊断具有一定的参考意义。

目前报道的检测CRP的方法有电化学发光法，荧光法，化学发光法，表面等离子体共振等，但是存在着检测时间长，灵敏度不够高等缺点。

SERS具有高灵敏、高选择性和检测速度快等优点，在生物分析化学领域具有广泛的应用。因此，开发一种基于SERS的CRP检测试剂及检测方法具有重要的意义。

发明内容

为实现对C反应蛋白的超灵敏检测，本发明的首要目的在于提供一种C反应蛋白检测试剂。

本发明的另一目的在于提供一种采用上述检测试剂对C反应蛋白进行SERS检测的方法。

本发明目的通过以下技术方案实现：

一种C反应蛋白检测试剂，由巯基化CRP适配体修饰的具有纳米间隙的核壳型纳米金(Au-NNPs)探针和氨基化CRP适配体修饰的银包裹的Fe₃O₄(AgMNPs)磁性捕获基底构成。

优选地，所述巯基化CRP适配体的DNA序列为：5'-CGAAGGGGATTCGAGGGGTGATTGCGTGCTCCATTTGGTGTTTTTTTTTTTT-(CH₂)₆-SH-3'；所述氨基化CRP适配体的DNA序列为：5'-CGAAGGGGATTCGAGGGGTGATTGCGTGCTCCATTTGGTGTTTTTTTTTTTT-(CH₂)₆-NH₂-3'。

优选地，所述巯基化CRP适配体修饰的Au-NNPs探针通过如下方法制备得到：

(1)将巯基修饰的单链DNA与金纳米粒子(AuNPs)混合，经冷冻、解冻，得到DNA修饰的纳米金(DNA-AuNPs)；修饰DNA的目的是为了形成纳米间隙；

(2)将4-ATP(对氨基苯硫酚)与DNA-AuNPs在搅拌条件下混合孵育，产物经离心分离后分散于超纯水中，得到4-ATP修饰的金纳米粒子(4-ATP-DNA-AuNPs)溶液；