[发明专利]一种针对中性疏水性多肽的纯化方法

权利要求书

1.一种针对中性疏水性多肽的纯化方法，其特征在于：包括以下步骤：

a、定义中性疏水性多肽的强弱性：

1）多肽序列中含有Ala,Ile,Val,Leu疏水性氨基酸的个数占有30-50%，定义为弱中性疏水性多肽；

2）多肽序列中含有Ala,Ile,Val,Leu疏水性氨基酸的个数占有50-100%，定义为强中性疏水性多肽；

b、根据中性疏水性多肽的强弱性选择不同的溶解方法：

1）针对弱中性疏水性多肽：选择丙酮或异丁醇中的一种大量稀释震荡搅拌，经过硅藻土与硅胶填料不同配比做成的PE柱过滤得清液；

2）针对强中性疏水性多肽：选择六氟异丙醇或尿素中的一种溶解，经过硅藻土与硅胶填料不同配比做成的PE柱过滤得清液；

c、根据选择不同的溶解方法选择不同的分析与制备的流动相体系：

1）丙酮大量稀释震荡搅拌，过硅藻土与硅胶填料的配比为4:1做成的PE柱，过滤得清液的溶解方法，选择丙酮和高氯酸水溶液做为流动相；

2）异丁醇大量稀释震荡搅拌，过硅藻土与硅胶填料的配比为3:2做成的PE柱，过滤得清液的溶解方法，选择异丁醇和硫酸铵水溶液做为流动相；

3）六氟异丙醇溶解多肽，过硅藻土与硅胶填料的配比为4:3做成的PE柱，过滤得清液的溶解方法，选择三氟乙醇和盐酸水溶液做为流动相；

4）尿素溶解多肽，过硅藻土与硅胶填料的配比为1:4做成的PE柱，过滤得清液的溶解方法，选择乙腈和尿素水溶液做为流动相；

d、根据选择不同的分析与制备的流动相体积，确定合适的色谱柱：

1) 丙酮和高氯酸水溶液做为流动相体系，色谱柱选择以普通硅胶键合的固定相填料的色谱柱C18，孔径选择300A；

2）异丁醇和硫酸铵水溶液做为流动相体系，色谱柱选择以普通硅胶键合的固定相填料的色谱柱C8或C4，孔径选择300A；

3）三氟乙醇和盐酸水溶液做为流动相体系，色谱柱选择以聚苯乙烯二乙烯苯为基质的固定相填料的色谱柱C18，孔径选择120A；

4）乙腈和尿素水溶液做为流动相体系，色谱柱选择以聚苯乙烯二乙烯苯为基质的固定相填料的色谱柱C18，孔径选择300A；

e、确立好纯化条件之后，对中性疏水性多肽进行洗脱收集，步骤如下：

1）配比硅藻土与硅胶填料不同比例的PE柱；

2）选择试剂溶解多肽样品，并使用相应的PE柱过滤得上清液，备用；

3）选择的流动相体系冲洗仪器与色谱柱，使整个系统达到平衡状态；

4）取上清液注入制备系统，通过仪器检测器信号采集收集样品，得中间体液体；

5）对中间体液体进行分析，确立纯度；

6）把合格的中间体液体过三氟醋酸盐树脂，得到常规的含有TFA盐的多肽产品；

7）对TFA样的多肽产品直接进行液氮冷冻；

8）把冷冻好的多肽产品进行低温冷冻干燥机干燥得固体粉末状成品。

2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于：选择使用硅藻土与硅胶填料不同配比做成的PE柱作为过滤装置。

3.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于：丙酮和高氯酸水溶液做为流动相，其中A相为纯丙酮溶液，B相为含有0.15%质量百分浓度的高氯酸水溶液，线性梯度10-65%。

4.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于：异丁醇和硫酸铵水溶液做为流动相，其中A相为纯异丁醇溶液，B相为含有0.18%质量百分浓度的硫酸铵水溶液，线性梯度12-70%。

5.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于：三氟乙醇和盐酸水溶液做为流动相，其中A相为纯三氟乙醇溶液，B相为含有0.05%质量百分浓度的盐酸水溶液，线性梯度10-60%。

6.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于：乙腈和尿素水溶液做为流动相，其中A相为纯乙腈溶液，B相为含有0.02%质量百分浓度的尿素水溶液，线性梯度8-65%。