[发明专利]靶向GPC3的CAR NK细胞

说明书

本发明涉及表达特异性识别GPC3的嵌合抗原受体的NK细胞。进一步地，本发明涉及该NK细胞在预防和/或治疗癌症，优选GPC3表达癌症中的用途。本发明还涉及该NK细胞作为靶向细胞治疗剂和/或用于过继性癌症免疫治疗的用途。本发明还涉及用于产生该NK细胞的方法、用于鉴别该NK细胞的方法以及通过该方法获得或鉴别的NK细胞及其用途。

技术领域

本发明属于细胞免疫治疗领域，具体涉及包含GPC3-CAR的NK细胞或细胞系。

背景技术

嵌合抗原受体(Chimeric antigen receptor，CAR)技术将识别肿瘤相关抗原的单链抗体和免疫细胞的活化基序相结合，通过基因转导可以赋予免疫细胞肿瘤靶向性、更强的杀伤活性和持久的生命力。该项技术最先在T细胞中实施并在CD19阳性的B淋巴细胞性白血病患者取得了巨大的成功。但由于CAR-T细胞是通过采集患者的T细胞，并进行修饰后给药的，为单人单次制备，治疗成本较高，并且，T细胞在体内的大量扩增通常引发细胞因子风暴，因此存在安全性的风险。

NK细胞作为重要的广谱强力的肿瘤免疫细胞，也能够通过CAR技术改造赋予其靶向识别并摧毁肿瘤细胞的作用。NK细胞有多个成熟的永生化的细胞系，其中NK-92可在体外长期培养扩增，基因表型稳定，研究结果具有可重复性，已有一些研究人员尝试将NK-92细胞表达CAR(例如CN201580032729.X)，但由于肿瘤组织具有极复杂的微环境，CAR-NK-92细胞能否在体内实现对肿瘤细胞的杀伤会受到多种因素的影响，具有极大的不确定性。并且由于前期CAR-T研发积累了大量的设计策略和构建方法方面的经验，CAR-NK的研发大多是对CAR-T的直接模仿和改造。

因此，本发明急需有效的CAR-NK细胞。

发明内容

本发明的目的在于提供一种表达特异性识别GPC3的嵌合抗原受体的NK细胞。

在具体的实施方式中，NK细胞可以是原代的NK细胞，也可以是NK92-细胞。例如，本发明提供一种表达特异性识别GPC3的嵌合抗原受体的NK-92细胞或细胞系。

本发明的另一目的在于提供所述NK-92细胞或细胞系在预防和/或治疗癌症，优选GPC3表达癌症中的用途。

本发明还有的目的在于提供所述NK-92细胞或细胞系作为靶向细胞治疗剂和/或用于过继性癌症免疫治疗的用途。

本发明还有的目的在于提供用于产生该NK-92细胞或细胞系的方法、用于鉴别该NK-92细胞或细胞系的方法以及通过该方法获得或鉴别的NK-92细胞或细胞系及其用途。

在第一方面，本发明提供一种基因工程改造的NK细胞，其特征在于，所述细胞表达特异性识别GPC3的嵌合受体，所述的嵌合受体包含识别GPC3的胞外域、跨膜域、和/或细胞内结构域。

在具体的实施方式中，所述NK细胞是NK-92细胞。

在优选的实施方式中，所述胞外域具有SEQ ID NO：7、8、9所示的HCDR1、HCDR2、HCDR3和/或及SEQ ID NO：10、11、12所示的LCDR1、LCDR2、LCDR3。

在具体的实施方式中，所述胞外域具有SEQ ID NO：7、8、9所示的HCDR1、HCDR2、HCDR3，以及SEQ ID NO：10、11、12所示的LCDR1、LCDR2、LCDR3。

在具体的实施方式中，所述特异性识别GPC3的胞外域含有SEQ ID NO：13所示的重链可变区和SEQ ID NO：14所示的轻链可变区。

在具体的实施方式中，所述特异性识别GPC3的胞外域具有SEQ ID NO：1所示的序列。

在具体的实施方式中，所述嵌合受体具有SEQ ID NO：16、17、18、或19所示的氨基酸序列。