[发明专利]一种PCR模板用DNA样本提取方法

说明书

一种PCR模板用DNA样本提取方法,包括如下步骤:鲜嫩叶片研磨成粉末,叶片容器中加入0.15‑0.3MOL/L摩尔浓度的氢氧化钠溶液,溶液质量为叶片质量的3‑10倍,所述氢氧化钠溶液中含有5‑10%质量浓度的EDTA‑2钠;以沸水加热氢氧化钠溶液和叶片粉末的混合物30‑120秒;摇匀后离心使悬浊液分层,取上清液,用1‑10MOL/升的Tris－HCl将上清液稀释5‑20倍,即得到植物DNA样本。采用本发明所述PCR模板用DNA样本提取方法，可以快速方便的提取DNA，并降低植物DNA提取过程中的氧化现象，提高DNA提取率。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及植物DNA样本提取，具体涉及一种PCR模板用DNA样本提取方法。

背景技术

DNA即脱氧核糖核酸是分子结构复杂的有机化合物。作为染色体的一个成分而存在于细胞核内。功能为储藏遗传信息。DNA 分子巨大，由核苷酸组成。植物DNA的提取是植物分子生物学和基因工程研究的一种基本的技术, 包括CTAB,SDS等多种方法；DNA活性极高，容易被氧化;现有技术中植物提取DNA中，DNA容易被氧化造成脱氧核酸样本变质损坏。

PCR(聚合酶链式反应）是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，加入设计引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。但DNA聚合酶在高温时会失活，因此，每次循环都得加入新的DNA聚合酶，不仅操作烦琐，而且价格昂贵，制约了PCR技术的应用和发展。

发明内容

为克服现有技术存在的技术缺陷，本发明公开了一种PCR模板用DNA样本提取方法。

本发明所述PCR模板用DNA样本提取方法,包括如下步骤:

鲜嫩叶片研磨成粉末,叶片容器中加入0.15-0.3MOL/L摩尔浓度的氢氧化钠溶液,溶液质量为叶片质量的3-10倍,所述氢氧化钠溶液中含有5-10%质量浓度的EDTA-2钠;

以沸水加热氢氧化钠溶液和叶片粉末的混合物 30-120秒;摇匀后离心使悬浊液分层,取上清液, 用1-10MOL/升的Tris－HCl将上清液稀释5-20倍,即得到植物DNA样本。

优选的，所述鲜嫩叶片研磨成粉末是在液氮浸泡环境下进行。

采用本发明所述PCR模板用DNA样本提取方法，可以快速方便的提取DNA，并降低植物DNA提取过程中的氧化现象，提高DNA提取率。

具体实施方式

下面对本发明的具体实施方式作进一步的详细说明。

本发明所述PCR模板用DNA样本提取方法,包括如下步骤:

鲜嫩叶片研磨成粉末,叶片容器中加入0.15-0.3MOL/L摩尔浓度的氢氧化钠溶液,溶液质量为叶片质量的3-10倍,所述氢氧化钠溶液中含有5-10%质量浓度的EDTA-2钠;

以沸水加热氢氧化钠溶液和叶片粉末的混合物 30-120秒;摇匀后离心使悬浊液分层,取上清液, 用1-10MOL/升的Tris－HCl将上清液稀释5-20倍,即得到植物DNA样本。

植物DNA提取检材应选择幼嫩叶片，如选择老叶，老叶中含有大量多糖和酚类杂质，不利于DNA提取。

研磨过程可以在液氮浸泡环境下进行，避免研磨过程中的空气氧化，液氮低温也利于带走研磨带来的热量，避免DNA受热变质。