[发明专利]衍生化HPLC-UV法测定甲磺酸酯的方法

说明书

本发明属于药品分析检测技术领域，具体涉及一种衍生化HPLC‑UV法测定甲磺酸酯的方法。使用2‑萘硫酚衍生化试剂对甲磺酸酯衍生化，生成在紫外光区252‑253nm有吸收的衍生化产物，利用HPLC反相分配色谱法在紫外光区252‑253nm测定甲磺酸酯的衍生化产物，从而实现对含甲磺酸的原料药中甲磺酸酯的定性与定量检测。采用本发明所述的测定方法测定时甲磺酸伊马替尼中甲磺酸伊马替尼和其他杂质均不会对分析造成干扰，该方法专属性良好；方法的检测限为0.03μg/ml，定量限为0.10μg/ml，线性关系良好；平均回收率在87.5‑102.1％之间，无明显的基质干扰；且衍生化产物在6h内稳定性良好。

技术领域

本发明属于药品分析检测技术领域，具体涉及一种衍生化HPLC-UV法测定甲磺酸酯的方法。

背景技术

潜在基因毒性杂质(potential genotoxic impurities)是强致突变剂和致癌剂，能够引起DNA突变、染色体断裂或者DNA重组，还可能导致人类肿瘤的发生。近几年来，随着基因毒性杂质法规的逐步完善，美国食品和药物管理局(FDA)和欧洲药物管理局(EMEA)等部门对基因毒性杂质的监管要求越来越高。药物中基因毒性杂质如果控制不当，可能会导致临床隐患，同时也会影响新药上市时间，因此，在药物生产过程中，对于潜在基因毒性杂质的控制十分重要。

甲磺酸酯是一类常见的潜在基因毒性杂质，近年来越来越受到药品监管部门的关注。甲磺酸酯的来源主要有两个，一是甲磺酸中的残留杂质，二是甲磺酸盐药物成盐过程的副产物。

甲磺酸甲酯(MMS)和甲磺酸乙酯(EMS)是两种常见的甲磺酸酯基因毒性杂质，欧洲药典9.0收载了气相色谱-质谱(GC-MS)法用于检测甲磺酸倍他司汀中甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯的标准方法，该方法需要将待测物衍生化成可挥发性的碘代烷烃，然后顶空进样，方能进行分析。而其他常见的用于测定甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯的方法大多数也都是基于质谱方法，虽然质谱检测器是一种灵敏和通用的检测器，然而高昂的价格限制了它的广泛使用。

高效液相色谱-紫外检测(HPLC-UV)法是药物质量控制的常用手段，开发一种简单、灵敏、稳定的HPLC-UV法用于含甲磺酸的原料药中甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯具有重要意义。然而该方法的开发面临一个重要挑战，即甲磺酸酯缺乏能用于紫外检测的发色基团，因此我们希望通过液相衍生化技术，利用亲核取代反应，引入发色基团来解决这个问题。三乙胺和哌啶被报道作为衍生化试剂用于液相色谱-质谱(LC-MS)法和毛细管色谱-质谱(CE-MS)法测定甲磺酸酯的含量。然而，这些衍生化试剂的产物(季铵盐)由于硅羟基作用会造成拖尾现象，降低检测灵敏度。五氟硫酚和硫氰酸盐是强亲核试剂，被用作衍生化试剂用于气相色谱-质谱(GC-MS)法测定甲磺酸酯含量；但五氟硫酚极易氧化，用于HPLC检测，会产生干扰；而硫氰酸盐衍生化会产生多种衍生化产物，导致低灵敏度。二硫代氨基甲酸盐类被报道作为衍生化试剂用于HPLC-UV法测定甲磺酸酯含量。然而，这类试剂中的硫代酰胺/硫代烷基酯基团与酸或碱易水解，而导致衍生化效率大大降低。2-巯基吡啶被报道作为衍生化试剂用于液相色谱-质谱-质谱(LC-MS-MS)法测定甲磺酸乙酯的含量。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种衍生化HPLC-UV法测定甲磺酸酯的方法。该方法简单，专属性好，线性关系良好，平均回收率高，衍生化产物稳定性良好，检测限较低。

本发明所述的衍生化HPLC-UV法测定甲磺酸酯的方法，使用2-萘硫酚衍生化试剂对甲磺酸酯衍生化，生成在紫外光区252-253nm有吸收的衍生化产物，利用HPLC反相分配色谱法在紫外光区252-253nm测定甲磺酸酯的衍生化产物，从而实现对含甲磺酸的原料药中甲磺酸酯的定性与定量检测。

本发明所述的衍生化HPLC-UV法测定甲磺酸酯的方法，具体包括以下步骤：

(1)用氢氧化钠调节反应体系pH到7-8，在80-100℃条件下，使用2-萘硫酚衍生化试剂对甲磺酸酯衍生化反应生成在紫外光区252-253nm有较强的吸收的衍生化产物；