[发明专利]一种用于提高血浆样本中游离DNA提取率的助沉剂

说明书

本发明公开了一种用于提高血浆样本中游离DNA提取率的助沉剂，是由如下配方组成，即，在每毫升血浆样本中添加：人类Cot‑1 DNA 3.2～5.3mg，Chelex‑100阳离子交换树脂1.4～2.2mg。实验表明：使用本发明所提供的助沉剂，能有效除去血浆中的干扰物质，能明显提高游离DNA的提取得率，进而可提高肿瘤游离DNA中基因突变的检出率(在同等提取条件下，可使游离DNA的提取得率达到99％以上，进而可使肿瘤游离DNA中基因突变的检出率从70％提高至90％)；另外，本发明所述助沉剂使用方便，只需添加到血浆样本中和使用现有的提取试剂盒，就可明显提高血浆样本中游离DNA的提取率。

技术领域

本发明是涉及一种用于提高血浆样本中游离DNA提取率的助沉剂，属于核酸提取技术领域。

背景技术

液体活检作为体外诊断的一个分支，是通过收集患者的血液对肿瘤患者的基因状态做出诊断，在临床医学领域具有广阔的应用前景。其中肿瘤游离DNA(ctDNA)作为一种无创肿瘤标志物，被认为具有良好的发展前景。然而，即便是在晚期肿瘤患者体内，绝大多数的患者血浆循环DNA(cfDNA)的含量非常低，给后续ctDNA的检测带来很大挑战。目前研究中较常用的血浆cfDNA的提取方法通常包括从全血中分离血浆、裂解、过柱结合、洗涤和洗脱几个步骤，可从血浆中提取游离核酸，但是即使是目前使用较为广泛的血浆游离DNA抽提试剂盒QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit(QIAGEN)提取的游离DNA得率仍不够高，不能很好的满足微量基因突变检测的需要。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明的目的是提供一种用于提高血浆样本中游离DNA提取率的助沉剂，为提高肿瘤游离DNA中基因突变的检出率提供支持。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种用于提高血浆样本中游离DNA提取率的助沉剂，由如下配方组成，即，在每毫升血浆样本中添加：

人类Cot-1 DNA 3.2～5.3mg；

Chelex-100阳离子交换树脂 1.4～2.2mg。

作为较佳方案，所述的助沉剂是由如下配方组成，即，在每毫升血浆样本中添加：

人类Cot-1 DNA 4.0～4.5mg；

Chelex-100阳离子交换树脂 1.6～2.0mg。

作为最佳方案，所述的助沉剂是由如下配方组成，即，在每毫升血浆样本中添加：

人类Cot-1 DNA 4.3mg；

Chelex-100阳离子交换树脂 1.8mg。

一种实施方案，在所述的助沉剂与血浆样本混匀后，于80～100℃加热5～15分钟，然后降温至室温，再进行游离DNA的提取。

一种优选方案，在所述的助沉剂与血浆样本混匀后，于90℃加热10分钟，然后降温至室温，再进行游离DNA的提取。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

实验表明：使用本发明所提供的助沉剂，能有效除去血浆中的干扰物质，能明显提高游离DNA的提取得率，进而可提高肿瘤游离DNA中基因突变的检出率(在同等提取条件下，可使游离DNA的提取得率达到99％以上，进而可使肿瘤游离DNA中基因突变的检出率从70％提高至90％)；另外，本发明所述的助沉剂使用方便，只需添加到血浆样本中和使用现有的提取试剂盒，就可明显提高血浆样本中游离DNA的提取率，应用范围广泛；因此，本发明相对于现有技术取得了显著性进步。