[发明专利]一种高效液相色谱-质谱法测定棉花中褪黑素的方法

说明书

本发明公开了一种高效液相色谱‑质谱法测定棉花中褪黑素的方法，包括：将棉花样品加液氮研磨成粉末，然后与提取溶剂混合，经超声提取后，以高效液相色谱‑质谱法检测，采用外标法对褪黑素进行定量。本发明首次实现了对棉花中褪黑素的提取和检测，检测方法的灵敏度高、专一性强、稳定性好、结果准确可靠。

技术领域

本发明涉及药物分析技术领域，具体涉及一种高效液相色谱-质谱法测定棉花中褪黑素的方法。

背景技术

褪黑素(Melatonin，MT)是一种吲哚类激素，化学名称为N-乙酰-5-甲氧基色胺，是一种广谱的生理调节剂。褪黑素主要来自于哺乳动物的松果体，被证实是目前已知的抗氧化作用最强的内源性白由基清除剂。其对睡眠、促进性腺发育和生理节奏具有重要作用。

除动物外，目前在大多数食用植物，部分菊科植物，药用植物以及一些植物种子中也发现了褪黑素的存在。其在植物中具有调节昼夜节律，光周期与生长发育的作用，此外对植物自身抵御冷害，光伤害，化学物质和重金属离子伤害的能力皆有提高作用。最新研究表明，褪黑素除了在植物生长发育及自然逆境下发挥作用外，还可以提高植物抵御疾病的能力。褪黑素在动物中的功能包括清除自由基、增强免疫力、抑制衰老等作用，其生理与药理功能的多样性得到了国内外学者的普遍重视，美国食品与药品管理局认可褪黑素作为普通膳食补充剂，中国卫生部则先后批准20余种含褪黑素产品作为改善睡眠的保健食品，全世界至今已经有数百万人长期服用。通过对植物材料中MT含量的提取与检测，可以评估相关食品的合理饮用量，为人们的健康饮食、功能保健食品的开发利用提供科学依据。

目前，测定褪黑素的方法主要有电化学分析法、免疫分析法、色谱法等，其中，电化学分析法和免疫分析法主要是针对人体血液或其他动物器官中的褪黑素检测，专门针对植物中褪黑素检测的参考方法较少；色谱法具有灵敏度高、准确度高等优点，在此基础上又延伸出高效液相色谱与荧光检测器联用法(HPLC-FD)、高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS)等检测方法。这些方法应用的范围依据植物的种类、检测的精确度和特异性要求并不一致。HPLC-FD是植物中褪黑素定量研究的常用方法，但其对仪器设备要求较高，且荧光检测结果易受到背景荧光、pH、检测温度、溶剂等条件的影响，对于与褪黑素结构相似的物质很难区分开；HPLC-MS可以同时提供目标激素的保留时间以及分子结构信息，具有灵敏度高，适合多组分分析，可靠稳定等优点，可以实现定性和定量分析的同时完成。

发明内容

针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种高效液相色谱-质谱法测定棉花中褪黑素的方法。该方法灵敏度高、专一性强、稳定性好，可以实现对棉花中的褪黑素进行快速、准确检测。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种高效液相色谱-质谱法测定棉花中褪黑素的方法，包括：将棉花样品加液氮研磨成粉末，然后与提取溶剂混合，经超声提取后，以高效液相色谱-质谱法检测，采用外标法对褪黑素进行定量。

优选的，所述提取溶剂为甲醇。

优选的，棉花样品与提取溶剂加入量的比为1g:10ml。提取溶剂的加入量会直接影响目标成分的提取效果。若提取溶剂的加入量过少，混合物浓度大，萃取时易发生乳化现象，且液体粘度大，空化较难发生；若提取溶剂的加入量过大，则不利于提取后溶剂的回收，造成提取溶剂的浪费，不利于节能环保。本发明对提取溶剂的用量进行了优化考察，结果发现，棉花样品与提取溶剂加入量的比为1g:10ml时，能够取得最优的提取效果。