[发明专利]一种高效液相色谱-质谱法测定番茄碱的方法

说明书

本发明公开了一种液相色谱‑质谱法测定番茄碱和番茄皂苷的方法，包括如下步骤：(1)对待测样品进行预处理；(2)通过液相色谱‑质谱法测定预处理后的样品中番茄碱和番茄皂苷的含量。本发明实现了对番茄样品材料中的番茄碱和番茄皂苷的同时检测，该方法精密度、准确度、稳定性均满足定量分析的要求，具有准确度高、重现性好、稳定、可靠的特点，也可用于番茄育种过程中对番茄碱含量变化的分析定量。

技术领域

本发明涉及药物分析技术领域，具体涉及一种液相色谱-质谱法测定番茄碱和番茄皂苷的方法。

背景技术

番茄碱又名番茄素，是番茄根茎、叶、青果中产生的次生代谢物，在番茄植株中的含量最高。番茄碱能够保护番茄植株在生长过程中免受细菌、真菌、病毒和某些昆虫的侵害，有明显的抗菌、驱虫的作用。据文献报道，番茄碱能够抑制某些对人和动物有危害的病原菌，具有显著的生物活性。

番茄皂苷是从番茄中分离得到的一种水溶性皂苷类化合物，主要存在于番茄的果实中，种子、叶子、茎等部位也有相当的含量。番茄皂苷具有一般皂苷的性质，国外特别是日本的研究人员对其理化性质及生理和药理活性进行了深入研究，证明番茄皂苷具有强的降血脂、降胆固醇、抗动脉硬化、抗氧化、抑制癌细胞增殖等生理活性。

目前对于番茄碱的研究较为深入，番茄碱的检测分析方法主要有高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱法(GC-MS)、分光光度法(VIS-UV)、质谱法(MS)、免疫测定法(Immunoassays)等。对于番茄皂苷的检测，目前仅见有采用高效液相色谱-蒸发光散射检测番茄中番茄皂苷A的报道(卢凤来等)。还未有能同时检测番茄碱和番茄皂苷的相关报道。

发明内容

针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种液相色谱-质谱法测定番茄碱和番茄皂苷的方法。该方法能快速、准确的检测番茄中番茄碱和番茄皂苷的含量。为番茄原料及其提取物的质量控制提供了保障，同时也为番茄育种提供了技术支持。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种液相色谱-质谱法测定番茄碱和番茄皂苷的方法，包括如下步骤：

(1)对待测样品进行预处理；

(2)通过液相色谱-质谱法测定预处理后的样品中番茄碱和番茄皂苷的含量。

优选的，步骤(1)中，样品预处理的方法为：将番茄材料加液氮磨成粉状，以甲醇作为溶剂进行提取，提取液离心，取上清液，过滤。

进一步的，提取方法具体为：每40mg番茄材料中加入1.5ml纯甲醇，涡旋震荡10s，4℃条件下，3000rpm离心10min，上清液过0.22μmPVDF滤膜。

番茄材料中，特别是番茄果肉中果胶含量较高，导致果肉难以充分破碎，提取不完全，并且果肉容易粘在器壁上，处理不方便，提取液难以过滤，定量不准。本发明通过向番茄材料中加液氮进行处理，方便番茄材料的粉碎，再用甲醇进行提取，不仅提取完全，而且能最大程度的减少样品中的有效成分损失，定量准确。更为重要的是，番茄材料中的成分复杂，再加之番茄碱和番茄皂苷的理化性质不同，通过一种提取方法同时将番茄碱和番茄皂苷从番茄材料中提取出来存在难度。

为此，本发明还对提取溶剂进行了优选，分别以水、纯甲醇、80％甲醇、50％甲醇、20％甲醇和乙醇作为溶剂提取同一样品，结果发现，以纯甲醇作为提取溶剂能最大程度的同时将材料中的番茄碱和番茄皂苷提取出来。

优选的，步骤(2)中，液相色谱-质谱法的色谱条件为：采用C18柱；流动相由A相和B相组成，A相为0.1％甲酸水溶液，B相为甲醇；采用梯度洗脱。

进一步的，所述梯度洗脱的程序为：0-0.2min，A相＝90％；0.2-6min，A相递减至10％；6-8min，A相＝10％；8-8.1min，A相递增至90％；8.1-10min，A相＝90％。