[发明专利]酸性海藻糖酶TreA及其基因和应用

说明书

本发明属于农业基因技术领域，具体涉及一种来源于真菌的酸性海藻糖酶及其基因和应用。本发明的海藻糖酶TreA的氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。本发明提供了一个新的海藻糖酶基因，其编码的海藻糖酶具有良好的性质，可以应用于昆虫防治、食品、淀粉糖、医药等工业。

技术领域

本发明属于农业基因技术领域，具体涉及一种来源于真菌的酸性海藻糖酶及其基因和应用。

背景技术

海藻糖是一种非还原性二糖，由两分子葡萄糖以α,α-1,1-糖苷键的连接形成，它的分子式为C₁₂H₂₂O₁₁，分子量大小为342.31，通常以二水化合物的形式存在。海藻糖在自然界中广泛存在，包括植物、藻类、真菌、细菌、昆虫等多种物种体内，被海藻糖酶分解成葡萄糖为机体提供能量。

海藻糖酶来源主要分为三类：第一类来源于细菌；第二类来源于植物和动物；第三类来源于真菌。根据酶催化反应的最适pH值，将真菌来源的海藻糖酶分为两种：一种是酸性海藻糖酶，一种是中性海藻糖酶。中性海藻糖酶存在于细胞内，受胞内磷酸化调控，但是它的耐热性不好。酸性海藻糖酶存在于细胞膜上，不受磷酸化的调控，它的耐热性比较好。

海藻糖酶可以广泛应用于食品、临床医疗、害虫防治等产业，因此，海藻糖酶的性质改良及作用机制的研究成为一个热点。现有的海藻酶比活低，且pH范围窄,不能满足现代产业的要求。

发明内容

为了解决现有的海藻酶不能满足现代产业需求的问题，本发明提供一种来源于真菌的酸性海藻糖酶，其具有优良的酶学性能，可以满足现代产业的要求。

本发明的目的在于提供一种海藻糖酶TreA。

本发明的再一目的在于提供编码上述海藻糖酶的基因。

本发明的再一目的在于提供含有上述基因的重组菌株。

本发明的再一目的在于提供上述海藻糖酶的制备方法。

本发明的再一目的在于提供上述海藻糖酶的应用。

本发明提供一种海藻糖酶TreA，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示：

其中，该酶全长1024个氨基酸，N端21个氨基酸为信号肽序列“MLVHTVVWLGVFLAFPGFTSA”。

因此，成熟的海藻糖酶TreA的理论分子量为112kDa，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示：

该海藻糖酶的最适pH为4.0，在pH 1.0-pH 9.0范围内，该酶能够维持其79％以上的酶活力；最适温度为60℃，在65℃下处理1h，可以保持70％酶活力，在70℃下处理30min，能够保持40％的酶活力，在80℃时依然具有30％的酶活力，因此，具有良好的稳定性。

本发明还提供了海藻糖酶TreA的cDNA，全长为3075bp，cDNA序列如SEQ ID NO.3所示：

其中，信号肽的碱基序列为：“ATGCTAGTCCACACTGTGGTATGGCTAGGAGTGTTCCTGGCCTTCCCCGGATTTACCTCGGCG”。因此，成熟基因的编码序列为SEQ ID NO.4所示：

成熟蛋白理论分子量为109.6kDa，此酶属于糖苷水解酶65家族。