[发明专利]一种促进TRAIL诱导的细胞凋亡的siRNA序列、载体及其用途

说明书

本发明公开了一种促进TRAIL诱导的细胞凋亡的siRNA序列、载体及其用途。所述序列如SEQ ID NO:1和2所示，和或SEQ ID NO:3和4所示。其具有有效的下调c‑FLIP_L或MADD表达，增强TRAIL诱导的对卵巢癌细胞的杀伤效应的功能。

技术领域

本发明涉及基因工程领域，尤其涉及促进TRAIL诱导的细胞凋亡的siRNA序列、载体及其用途。

背景技术

卵巢癌是常见的女性恶性肿瘤之一，由于发病隐匿，缺乏普查和有效的早期诊断方法，70％以上的患者就诊时已属晚期；另外由于对化疗药物的抵抗，卵巢癌预后极差，死亡率极高，因而急需寻找治疗卵巢癌药物开发的新靶点，进行更有效的治疗药物的筛选和开发。

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL(tumor necrosis factor-relatedapoptosis inducing ligand)是很强的细胞凋亡诱导剂,可选择性地诱导肿瘤细胞凋亡，而对正常细胞无杀伤作用。目前在美国已完成2期临床研究，是一个很有希望的抗肿瘤药物。但是卵巢癌细胞，尤其是上皮细胞型卵巢癌细胞(Epithelial ovarian cancer cells，约占卵巢癌患者的90％)对TRAIL诱导的细胞凋亡产生抵抗作用，限制了其广泛应用(Song,Chang et al.2014)。卵巢癌细胞对TRAIL诱导的细胞凋亡抵抗机理复杂，其中MADD和c-FLIP_L的高表达，是卵巢癌细胞对TRAIL诱导的细胞凋亡产生抵抗的主要原因。研究发现卵巢癌细胞中高表达MADD或c-FLIP_L可分别阻止FADD与DRs的结合以及pre-caspase-8与FADD的结合，从而抑制TRAIL诱导的卵巢癌细胞凋亡；而序列特异的siRNA分别下调MADD和c-FLIP_L表达可明显促进TRAIL诱导的细胞凋亡(Clarke and Tyler 2007,El-Gazzar,Wittinger et al.2010,Li,Jayaram et al.2011)。由于MADD和c-FLIP_L分别位于TRAIL诱导的细胞凋亡途径的不同环节，因而同时抑制MADD和c-FLIP_L的表达有望激活TRAIL诱导的细胞凋亡途径，有可能达到治疗卵巢癌的目的。

siRNA作为治疗肿瘤的药物有很多优点：如用量少，特异性强，可以联合使用等。但也存在一些局限性，如血液稳定性差，清除快，半衰期短，不易进入细胞等。因而必须借助特定的载体，才能特异、有效地导入病灶部位，达到靶向治疗的目的。临床试验中常用病毒载体或非病毒载体介导siRNA，将其高效的导入体内。目前使用的最安全的病毒载体主要是腺相关病毒(AAV)(Tomar,Matta et al.2003)。临床前研究表明，AAV-shRNA可有效的治愈异种移植的小鼠前列腺癌(Sun,Tang et al.2010)。利用病毒为载体进行疾病治疗，最大的担忧在于其安全性，但是根据美国FDA报道的近70项以AAV为载体的I期或II期临床研究结果显示，尚未发现因其安全性而终止实验的例子(Bowles,McPhee et al.2012)。表明以腺相关病毒为载体进行药物开发是安全的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种促进TRAIL诱导的细胞凋亡的siRNA序列及其靶向递送方法。其具有有效的下调c-FLIP_L或MADD表达，增强TRAIL诱导的对卵巢癌细胞的杀伤效应的功能。

为实现上述目的，本发明提供一种促进TRAIL诱导的细胞凋亡的siRNA序列，其特征在于，所述序列如SEQ ID NO:1和2所示，和或SEQ ID NO:3和4所示。

本发明还提供一种重组载体，其特征在于，含有上述所述的序列。

进一步，所述重组载体为含有上述所述的序列的AAV重组载体。

进一步所述siRNA序列与所述重组载体具有有效的下调c-FLIPL或MADD表达的效果。