[发明专利]一类腺苷衍生物在人急性髓性白血病细胞中的应用

说明书

本发明提供了一类腺苷衍生物在人急性髓性白血病细胞中的应用，属于生物化学与分子生物学技术领域。本发明的数据建立在腺苷衍生物oTR、KR、BAR、iPR对人的9大瘤系60种肿瘤细胞系具有非常显著的体外增殖抑制活性，其中对白血病细胞株的药物敏感性最强的基础之上。

技术领域

本发明涉及腺苷衍生物ortho-Topolin Riboside(oTR)、Kinetin riboside(KR)、N⁶-Benzyladenosine(BAR)、N6-Isopentenyladenosine(iPR)对人急性髓系白血病细胞株的促分化抗肿瘤作用，属于生物化学与分子生物学技术领域。

背景技术

目前越来越多的研究发现，细胞分裂素不仅调节植物的生长发育同时对动物细胞的增殖和生长也具有重要作用。研究发现细胞分裂素ortho-Topolin Riboside(oTR)、Kinetin riboside(KR)、N⁶-Benzyladenosine(BAR)、N6-Isopentenyladenosine(iPR)在体外对癌细胞具有很强的毒性和促凋亡作用。从结构上看，可知这些细胞分裂素均属于腺苷衍生物。当用这些细胞分裂素处理癌细胞后导致细胞周期不同程度的受阻和(或者)凋亡，这主要取决于不同的细胞系对不同的腺苷衍生物的敏感度。尽管天然的CK和它们的类似物对动物细胞的作用已经被多次报道，但是目前还没有一个系统的对这些腺苷衍生物的促分化作用进行研究。

急性髓细胞样白血病(AML)是一种发展为骨髓细胞的克隆性血液系统恶性疾病，其特征在于正常造血细胞分化中不受控制的增殖和阻断，全反式维甲酸(ATRA)可以通过诱导分化来治愈独特的AML亚型---急性早幼粒细胞白血病(APL)。然而，ATRA介导的分化疗法不适用于其他类型的AML并且ATRA诱导疗法尚存在疗效不稳定、部分患者易复发等问题。因此，AML治疗迫切需要能够克服分化停滞的新型毒性较低的治疗剂。

发明内容

本发明针对上述现有技术，本发明提供了一类腺苷衍生物ortho-TopolinRiboside(oTR)、Kinetin riboside(KR)、N⁶-Benzyladenosine(BAR)、N6-Isopentenyladenosine(iPR)在人白血病细胞株U937中促分化的应用。

本发明的技术方案：

一类腺苷衍生物在人急性髓性白血病细胞中的应用，步骤如下：

(1)细胞培养：将人急性白血病细胞株U937悬浮于含有灭活胎牛血清的无菌的DMED培养液中，置于浓度为5％CO₂、相对湿度为90％、温度为37℃的培养箱中培养，细胞长至培养瓶底面积的70％～80％传代1次；

(2)药物配制：oTR、KR、BAR、iPR均用0.1％DMSO溶解，继续用无菌DMEM培养基将溶解好的oTR、KR、BAR、iPR均稀释至浓度为0.1μM-30μM，过滤除菌，室温保存；

(3)处理细胞：将步骤(1)处于对数生长期的5×10⁴～1×10⁵个细胞接种于每孔含有1mlDMEM培养液的24孔板中，设置8组实验，第1组：空白对照组；第2组：10μMoTR组；第3组：10μM KR；第4组：10μM BAR；第5组：10μM iPR组；向各组中加入对应的药物，置于浓度为5％CO₂、相对湿度为90％、温度为37℃的培养箱中孵育36小时，收集细胞；

(4)检查分化指标：收集步骤(3)处理的细胞并用含0.2％FBS的PBS洗涤三次；将细胞与封闭抗体在室温下孵育15分钟，然后在4℃在黑暗中与抗人CD11b-PE抗体温育30分钟后洗涤细胞，并通过流式细胞术分析；