[发明专利]一种胃癌风险标志物联合定量检测试纸及制备方法

权利要求书

1.一种胃癌风险标志物联合定量检测试纸及制备方法，所述胃癌风险标志物包括胃蛋白酶原Ⅰ、胃蛋白酶原Ⅱ与胃泌素17，其特征在于：所述胃癌风险标志物联合定量检测试纸包括盒体，所述盒体包括底板与盒盖，所述盒体内设有检测试纸，所述检测试纸下方设有底板，检测试纸上方与盒盖连接；所述盒盖设有通孔区；所述检测试纸上方设有检测区，检测区与通孔区相对应；所述检测区包括样品垫、胃癌风险标志物抗体磁性稀土荧光微球标记垫、包被膜和吸水垫，所述包被膜上设有三条胃癌风险标志物定量检测线和一条质控区C线，所述检测线与质控区C线平行排列。

2.根据权利要求1所述一种胃癌风险标志物联合定量检测试纸及制备方法，其特征在于：所述磁性稀土荧光微球标记垫上的磁性稀土荧光微球为高分子材料包裹磁性稀土荧光复合物的纳米微球，所述磁性稀土荧光微球的球径为 10~500nm，荧光发射波长范围为 400~ 800nm，磁性稀土荧光微球表面修饰活性基团为为氨基、羧基或巯基。

3.根据权利要求1所述一种胃癌风险标志物联合定量检测试纸及制备方法，其特征在于：所述包被膜两端分别与吸水垫和胃蛋白酶原Ⅰ/胃蛋白酶原Ⅱ/胃泌素17抗体标记垫相互交叠连接；所述包被膜为硝酸纤维素膜；所述胃癌风险标志物抗体标记垫上方压贴有样品垫，所述样品垫为玻璃纤维样品垫。

4.根据权利要求3所述一种胃癌风险标志物联合定量检测试纸及制备方法，其特征在于：所述胃癌风险标志物抗体标记垫为玻璃纤维或聚酯纤维。

5.一种胃癌风险标志物联合定量检测试纸及制备方法，包括胃癌风险标志物抗体标记与制备检测试纸，所述胃癌风险标志物抗体标记步骤：

① 用羧基化聚苯乙烯微球包裹Eu3+-Fe3O4复合物制备的磁性稀土荧光微球，粒径200nm，固含量为1%；

② 取上述微球1mL，加入5mL pH 7.0 0.02M 3-(N-玛琳代)丙磺酸缓冲液（MOPS），混匀，25000rpm离心10min，弃上清；再加入5mL MOPS，90W超声，工作2s，间歇5s，重复2次，25000rpm离心10min，弃上清；

③ 再次加入5mL MOPS，90W超声，工作2s，间歇5s，重复2次，完成对微球的清洗；

④ 在清洗后微球中加入15mg EDC和50mg sulfo-NHS，涡旋混匀后，37℃反应15min；

⑤ 反应完成后，加入2-巯基乙醇8.6μl，终止羧基的活化；

⑥ 分别加入胃蛋白酶原Ⅰ、胃蛋白酶原Ⅱ、胃泌素17对应抗体各1mg，置于旋转培养箱上，37℃反应90~120min；

⑦ 然后加入100μL 5% BSA 和100μL 1% PEG20000，对未标记的位点进行封闭，置于旋转培养箱上，37℃反应60min；

⑧ 反应结束后，将上述液体2000rpm离心15min，弃上清，加入保存液（含1% BSA、10%蔗糖、2%海藻糖的pH8.0 0.2M 硼酸硼砂缓冲液），5mL，超声2s；

⑨ 将标记后的微球稀释50~100倍，每支200μL分装，即为单人份半成品，与胃蛋白酶原Ⅰ/胃蛋白酶原Ⅱ/胃泌素17测定试纸配合使用。

6.根据权利要求5所述的一种胃癌风险标志物联合定量检测试纸制备方法，所述胃癌风险标志物联合定量检测试纸制备步骤：

① 用BIODOT 三维喷金点膜仪，以1μL/cm参数，在硝酸纤维素膜上包被胃蛋白酶原Ⅰ、胃蛋白酶原Ⅱ、胃泌素17相应的抗体三条检测线，和一条羊抗鼠/羊抗兔IgG质控线，37℃干燥16小时，作为反应膜；

② 用含0.5% Tween-20的0.1 M PBS溶液浸泡玻璃纤维，然后37℃干燥16小时，裁剪17mm×300mm为作为样品垫；

③ 将样品垫、反应膜和吸水纸（22mm×300mm）以层层叠压的形式黏贴组装在底板上。