[发明专利]一种白酒丢糟的高效水解菌株的筛选方法

说明书

本发明公开一种白酒丢糟的高效水解菌株的筛选方法，其特征在于：包含以下步骤：第一、菌种库中相关水解白酒丢糟可能水解白酒丢糟的有效真菌、从白酒丢糟堆放环境中直接分离培养真菌；第二、将筛选出来的真菌以白酒丢糟中难以水解的单一聚合物为唯一碳源，依次通过羧甲基纤维素钠—刚果红培养基、PDA—苯胺蓝培养基、木聚糖—刚果红培养基进行初步筛选；第三、将菌株在以白酒丢糟为唯一营养物质的丢糟液中培养，判断菌株对丢糟水解能力；第四、将复合菌组在白酒丢糟液中进行酶活力测试，筛选具有协同作用、酶活力高的菌组即为高效复合水解菌组；第五、将高效复合菌组与公开发表过的具有高效水解纤维素的突变菌株的酶活力以及水解生物质的能力进行比较。

技术领域

本发明涉及水解白酒丢糟方案的优化研究，特别涉及二组新的高效水解白酒丢糟的复合菌组的筛选研究。

技术背景

白酒丢糟是谷物等经过反复发酵及蒸馏提取酒精后营养贫瘠的谷物外壳及残留渣体。即丢糟水分、木质纤维素(纤维素、半纤维、木质素)含量高，粗蛋白、粗脂肪等含量低,因为丢糟营养成分少，木质纤维素难水解，所以不能像一般酒糟那样有效的利用,从而使丢糟的转化受到极大的限制。况且丢糟酸度大，水分含量较高，极易腐败变质造成厂区及周围环境污染。而大大小小的酒厂分布在中国各地，这些酒厂给当地居民带来收入的同时，也产生了大量的丢糟，年排放量超过了20万吨。如何处理这些丢糟也是当地政府及酒厂管理人员头痛的事。

近年来，利用微生物处理生物废料成为热点，因为与物理及化学处理方式所需要昂贵的设备及试剂相比，生物预处理是在温和的条件下通过利用微生物固体发酵水解木质纤维素类生物，设备要求无特殊，并且非病原性水解木质纤维素的微生物在环境中广泛存在，具有廉价、易获得、环保等优点。

发明内容

本发明要解决的技术问题：针对丢糟酸度大、营养低、可利用价值低、污染环境的情况，提供一种以微生物高效复合菌组来提高丢糟水解速率，减小废渣存放空间，降低废渣处理成本的技术方案，促进维持良好生态环境,达到可持续循环利用白酒丢糟，为零排放无污染的政府倡导企业目标打下基础。

本发明的技术方案：一种白酒丢糟的高效水解菌株的筛选方法，包含以下步骤：第一、从荷兰Westerdijk Fungal Biodiversity institute菌种库中相关水解白酒丢糟所需要的关键酶信息来筛选可能水解白酒丢糟的有效真菌、从白酒丢糟堆放环境中直接分离培养出可在极酸及营养成分贫乏条件下生长的真菌；第二、将筛选出来的真菌以白酒丢糟中难以水解的单一聚合物为唯一碳源，依次通过羧甲基纤维素钠—刚果红培养基、PDA—苯胺蓝培养基、木聚糖—刚果红培养基进行初步筛选；第三、将第二步中直径与水解、显色圈比值较大的菌株，在以白酒丢糟为唯一营养物质的丢糟液中培养，测试酶活力，判断菌株对丢糟水解能力大小，作为进一步筛选；第四、通过将酶活值高的菌株组成复合菌组，将复合菌组在白酒丢糟液中进行酶活力测试，筛选具有协同作用、酶活力高的菌组即为高效复合水解菌组，并利用产酶优化培养基优化高效复合菌组产酶能力；第五、将高效复合菌组与公开发表过的具有高效水解纤维素的突变菌株的酶活力以及水解生物质的能力进行比较。

所述的高效水解菌株为CBS 113.65 Oidiodendron echinulatum、CBS246.84Phanerochaete chrysosporium、CBS 383.78 Trichoderma reesei、CBS554.65Aspergillus niger、CBS 110.42 Aspergillus niger和GYM-37 Bjerkanderaadusta中的一种或一种以上组合。

优选的，高效水解菌株为CBS 383.78+CBS 554.65和CBS 383.78+CBS554.65+GYM-37两个复合菌组。

所述的白酒丢糟堆放环境中直接分离培养包含：