[发明专利]一种美洲大蠊成纤维细胞生长因子及其表达纯化方法

说明书

本发明公开了美洲大蠊成纤维细胞生长因子FGF基因序列及其在大肠杆菌中表达和纯化方法，属于基因工程领域。本发明所提供的FGF基因具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列及SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。经测定，美洲大蠊FGF纯化条带较为单一，纯度较高，并进行了细胞划痕实验，发现其具有促进细胞迁移的活性。

技术领域

本发明属于基因工程领域，具体涉及一种美洲大蠊生长因子FGF及其表达纯化方法。

背景技术

FGFs是一种信号肽，可以调节重要的细胞过程如增殖、分化、迁移、附着、生存等。可通过与细胞表面不同受体结合，对不同靶细胞有不同的影响。FGF/FGFR信号通路通过促进血管发生，故在许多生理进程中有重要作用，例如胚胎发育、成人组织内稳态及创面愈合。目前，成纤维生长因子(FGF)研究较多的是哺乳动物类如人、牛、猪等，昆虫类研究极少。

美洲大蠊(Periplaneta americana)是一种古老生物，属昆虫纲，蜚蠊目，蜚蠊科，俗称蟑螂。广泛分布于热带、亚热带地区，全世界发现并记录的种类约3000余种，中国蟑螂种类记载已超过500余种，但其中被开发利用的仅有几种，美洲大蠊就是代表性的一种。且美洲大蠊FGF还未有相关的任何报道。故对美洲大蠊生长因子FGF进行原核表达并进行纯化是具有意义的。这将对昆虫生长因子FGF的研究具有重要意义，并为美洲大蠊生长因子类的开发利用提供基础。

发明内容

本发明的目的在于提供一个美洲大蠊生长因子FGF及及其表达纯化方法。

本发明提供了一种美洲大蠊生长因子FGF，具有如序列表SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。

本发明所述美洲大蠊生长因子FGF，具有如序列表SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。

另外，本发明所述的美洲大蠊生长因子FGF具有促进细胞迁移的活性。

进一步的，本发明提供了一种美洲大蠊生长因子FGF的表达方法，所述表达方法包括如下步骤：

a.将美洲大蠊FGF从转录组数据库中筛选出来，对FGF基因进行ORF、信号肽、密码子分析；

b.用ORF Finder在线软件找出美洲大蠊PDGF基因中最大ORF；并将ORF进行信号肽分析，将信号肽去除，将去除信号肽的基因进行密码子优化，并合成；

c.将合成基因克隆入原核表达载体中，转化宿主菌，培养所得重组工程菌，然后诱导其表达目的蛋白；

d.采用柱层析方法对目的蛋白进行纯化，从而获得重组美洲大蠊生长因子FGF。

进一步的，步骤c所述原核表达载体为pGEX-6P-1。

进一步的，步骤c所述宿主菌为大肠杆菌BL21。

最后，步骤c所述诱导的诱导剂是IPTG，浓度为0.4mmol/L，诱导温度为25℃，诱导时间为6h。

附图说明

图1是美洲大蠊生长因子FGF菌体表达SDS-PAGE电泳鉴定(泳道M为Marker；泳道1为未诱导菌体沉淀；泳道2为诱导后菌体沉淀)

图2是美洲大蠊生长因子FGF表达条件优化(泳道M为Marker；泳道1-3：表达条件分别为25℃、6h，16℃、12h，37℃、4h诱导后菌液超声后上清液；泳道4-8：表达条件分别为IPTG终浓度为0.2mM、0.4mM、0.6mM、0.8mM、1mM时菌液超声后上清液)

图3是美洲大蠊FGF纯化图(第1泳道为未经纯化FGF样品；第5泳道为Marker；第2-4泳道为样品穿透液；第6-11泳道为洗脱液，即为纯化后蛋白样品)

图4是蛋白标准曲线