[发明专利]一种编辑水稻Ehd1基因培育长生育期粳稻品种的方法

权利要求书

1.一种编辑水稻Ehd1基因培育长生育期粳稻品种的方法，其特征在于：包括如下步骤：利用CRISPR/Cas9基因编辑系统编辑水稻Ehd1基因接收结构域，减弱或抑制水稻中Ehd1基因的表达，从而培育生育期中等或高度延长水稻品种的方法；

所述CRISPR/Cas9基因编辑系统由CRISPR-ED1-RD质粒载体组成；

所述CRISPR-ED1-RD基因编辑载体是特异性针对水稻Ehd1 基因接收结构域起始区进行定点编辑，其sgRNA的序列如下：5^，-GCCTTATGGACTAAGAGTTC-3^，；所述CRISPR-ED1-RD质粒载体是由VK005-1载体与引物二聚体连接得到；

所述引物二聚体由正向引物和反向引物组成，其中正向引物为5^， -CAGGCCTTATGGACTAAGAGTTC-3^，，反向引物为3‘-CGGAATACCTGATTCTCAAGAAC-5’。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：sgRNA所靶标的水稻基因序列如下：5^，-GCCTTATGGACTAAGAGTTCTGG-3^，。

3.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于：所述抑制水稻中Ehd1基因的表达的方法，包括如下步骤：将含有所述CRISPR-ED1-RD质粒的根癌农杆菌转入水稻品种，通过对水稻中Ehd1基因进行定点编辑并经过对再生植株的鉴定，选择纯合移码突变实现的。

4.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于：所述减弱水稻中Ehd1基因的表达的方法，包括如下步骤：将含有所述CRISPR-ED1-RD质粒的根癌农杆菌转入水稻品种，通过对水稻中Ehd1基因接收结构域进行基因编辑，并经过对再生植株的鉴定，选择纯合型的接收结构域框内缺失突变实现的。

5.如权利要求3或4中所述的方法，其特征在于：所述再生植株的鉴定为突变植株鉴定，具体包括如下步骤：通过Ehd1基因的特异性引物扩增Ehd1基因的基因组片段并进行测序实现的；所述特异性引物序列如SEQ ID NO.1-2所示。

6.一种ehd1短等位基因，其特征在于：通过基因编辑在Ehd1接收结构域起始区产生GlyLeu Arg 3个氨基酸缺失所形成的短等位基因，具有中等延迟水稻开花两周时间的功能；所述ehd1短等位基因其编码区核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

7.如权利要求6所述的ehd1短等位基因，其特征在于：所述ehd1短等位基因的蛋白为如序列SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列组成的蛋白质。

8.如权利要求6-7任一所述ehd1短等位基因在中等延长水稻生育期育种中的应用。