[发明专利]细胞分群方法

说明书

本发明涉及一种细胞分群方法，包括以下步骤：使用第一荧光染料标记的第一探针和第二荧光染料标记的第二探针对同一份待检测样品进行荧光染色得到染色后样品，所述第一荧光染料和所述第二荧光染料具有部分或全部重叠的荧光发射光谱，且所述第一荧光染料和第二荧光染料在其重叠的荧光发射光谱的至少一个区间内的荧光强度的比值大于3:1；将所述染色后样品经流式细胞术检测得到所述区间内的荧光强度结果，根据所述荧光强度结果区分细胞亚群。本发明的细胞分群方法最少只需通过一个荧光通道的荧光强度差异即可区分不同细胞类群，如此可以减少需要的荧光通道数量，使用更少的荧光通道完成细胞分群的工作，降低对仪器设备的要求。

技术领域

本发明涉及生物化学领域，特别是涉及一种细胞分群方法。

背景技术

流式细胞术(Flow Cytometry，FCM)是一种对单个细胞表面或细胞内化学成分进行定量分析和分选的技术，主要通过采集前向散射光(FSC)和侧向散射光(SSC)将细胞大小和细胞内粒度不同的细胞分开，并通过识别细胞表面和细胞内特异的荧光标记，实现对DNA、RNA、细胞因子、细胞表面抗原等的检测。该技术作为一种快速细胞分析技术，不仅应用于免疫学、微生物学等基础医学研究，更广泛应用于肿瘤学、血液学等临床检测。例如流式细胞术可以通过识别细胞表面特异的免疫荧光信号，来实现T淋巴细胞亚群的区分，有助于评价机体的细胞免疫功能。但是，目前通过流式细胞术进行细胞分群时需要较多的荧光通道，因此对仪器的要求也相应较高，提高了应用的门槛和成本。

发明内容

基于此，有必要提供一种需要的荧光通道较少的细胞分群方法。

一种细胞分群方法，包括以下步骤：

使用第一荧光染料标记的第一探针和第二荧光染料标记的第二探针对同一份待检测样品进行荧光染色得到染色后样品，所述第一荧光染料和所述第二荧光染料具有部分或全部重叠的荧光发射光谱，且所述第一荧光染料和所述第二荧光染料在其重叠的荧光发射光谱的至少一个区间内的荧光强度的比值大于3:1；

将所述染色后样品经流式细胞术检测得到所述区间内的荧光强度结果，根据所述荧光强度结果区分细胞亚群。

本发明的细胞分群方法使用不同的荧光染料与不同的探针(例如抗体等)连接，利用不同类群细胞可结合不同种类探针的特性标记不同类群细胞，同时由于第一荧光染料和第二荧光染料的荧光发射光谱具有重叠区域，均可受激发在所述重叠区域发射荧光；且第一荧光染料和第二荧光染料在重叠的荧光发光光谱的某个区间内(在流式细胞术中又称为荧光通道，其区间的波长范围由流式细胞仪中的滤光片控制)，第一荧光染料和第二荧光染料的荧光强度有明显差异(例如，其比值大于3:1)，因此只需通过该荧光通道的荧光强度差异即可区分出不同细胞类群。如此可以减少需要的荧光通道数量，使用更少的荧光通道完成细胞分群的目的，从而降低了对流式细胞仪器的要求，降低流式细胞术在医疗和科研领域的应用成本和门槛。

在其中一个实施例中，所述第一荧光染料和所述第二荧光染料选自以下荧光染料中的两种：荧光蛋白、荧光量子点、香豆素类荧光染料、罗丹明类荧光染料、花菁类荧光染料、方酸类荧光染料、氟化硼络合二吡咯甲川类荧光染料、高聚物荧光染料以及由上述荧光染料中的至少两种荧光染料所构成的串联染料。

在其中一个实施例中，所述第一荧光染料为荧光蛋白类的别藻蓝蛋白，所述第二荧光染料为花菁类荧光染料的Cy5。

在其中一个实施例中，所述第一荧光染料为荧光蛋白类的藻红蛋白，所述第二荧光染料为罗丹明类荧光染料的RBITC。

在其中一个实施例中，所述第一荧光染料为量子点QD525，所述第二荧光染料为罗丹明类荧光染料的异硫氰酸荧光素(FITC)。

在其中一个实施例中，所述第一探针和所述第二探针为抗体，所述抗体为单克隆抗体或多克隆抗体。