[发明专利]一种高亲和PD-1蛋白突变体

说明书

本发明公开了一种高亲和PD‑1蛋白突变体，通过将野生型PD‑1的氨基酸位点突变：K135M；得到具有更高亲和力的PD‑1蛋白突变体，不但可以显著上调T细胞活化和细胞因子分泌，同时还可以降低使用剂量，降低治疗成本。本发明还提供了该突变体或其制剂在制备治疗、预防、或者缓解肿瘤相关疾病等药物中的用途。

技术领域

本发明涉及分子生物领域，尤其涉及一种高亲和PD-1蛋白突变体，蛋白的结构、对应氨基酸、对应基因序列、制备方法及应用。

背景技术

程序性细胞死亡蛋白(PD-1)是一种具有268个氨基酸的I型膜蛋白，属于CD28家族成员，其基因位于2号染色体上(The EMBO Journal(1992)，vol.11，issue 11，p.3887-3895)，其中人的PD-1cDNA由如EMBL/GenBank Acc.No.NM_005018所示的碱基序列组成。据报告，PD-1蛋白主要表达于CD4⁺CD8⁺的T细胞表面上(International Immunology(1996)，vol.18，issue5，p.773-780.，J.Experimentaled.(2000)，vol.191，issue 5，p.891-898.)。在骨髓细胞中也观察到PD-1的表达，包括由抗原受体刺激活化的T细胞或B淋巴细胞或活化的巨噬细胞表面(International Immunology(1996)，vol.18，issue5，p.765-772.)。

PD-1是一种免疫抑制性分子，它的两个糖蛋白配体已得到鉴定，即PD-L1和PD-L2，其被证实与PD-1结合后能够传递免疫抑制性信号，下调T细胞活化和细胞因子分泌，促进肿瘤逃避免疫系统的监控与杀伤(Freeman et al.(2000)J.Exp.Med.192:1027-34；Latchmanet al.(2001)Nat.Immunol.2:261-8；Carter et al.(2002)Eur.J.Immunol.32:634-43；Ohigashi et al.(2005)Clin.Cancer Res.11:2947-53)。

阻断PD-1和PD-L1相互作用成为治疗肿瘤的一条有效途径(Sharma and Allison2015)。目前已知的针对PD-1/PD-L1相互作用的抗肿瘤药物为单克隆抗体药物。然后单抗药物具有免疫原性，个体差异性以及适应症有限等先天局限性，因此设计高亲和PD-1突变体来作为体内PD-1/PD-L1通路的竞争性抑制剂对于调控PD-1通路具有好的应用前景，不但可以恢复T细胞活化和提高细胞因子分泌水平，同时还有可能用于分子探针来检测肿瘤生长情况(Maute，Gordon et al.2015，Abdin，Zaher et al.2018)。

发明内容

基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种高亲和PD-1蛋白突变体。

本发明的技术方案如下：

一种高亲和PD-1蛋白突变体，其氨基酸序列为以下组中的任意一个；

A、如SEQ ID NO：1或3或5或7中的任一所示氨基酸序列；

B、如SEQ ID NO：1或3或5或7中的任一所示氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸所得功能相同或相似的氨基酸序列。

一种高亲和PD-1蛋白突变体，其基因序列为以下组中的任意一个；

A、如SEQ ID NO：2或4或6或8中的任一所示基因序列；

B、如SEQ ID NO：2或4或6或8中的任一所示基因序列中经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个基因所得功能相同或相似的基因序列。

一种高亲和PD-1蛋白突变体，该蛋白质选自野生型PD-1的四个氨基酸位点突变：M70I、S87W、A129H、K135M。