[发明专利]一种用于脂肪酶固定化的氨基化改性复合磁性纳米载体的制备方法

权利要求书

1.一种用于脂肪酶固定化的氨基化改性复合磁性纳米载体的制备方法,

其特征在于，包括以下步骤：

S1：将磁性纳米Fe3O4-SiO2载体先用0.5mol/L-5mol/L的NaOH溶液进行超声洗涤10min-30min去油；

S2:将去油的磁性纳米Fe3O4-SiO2载体双氧水碱性溶液进行表面的活化，使其暴露更多的羟基自由基；

S3：将活化的载体用硅烷偶联剂(Kh-550)改性，改性后得载体G0；

S4：将载体G0与甲基丙烯酸和乙二胺进行接枝反应，得到氨基化改性载体G1；

S5:将氨基化改性后的G1载体固定化脂肪酶，将制备的固定化脂肪酶置于0-4℃保存备用。

2.根据权利要求1一种用于脂肪酶固定化的氨基化改性复合磁性纳米载体的制备方法，其特征在于，磁性纳米Fe3O4-SiO2载体粒径为30nm-50nm、SiO2包裹厚度为3nm-5nm。

3.根据权利要求1一种用于脂肪酶固定化的氨基化改性复合磁性纳米载体的制备方法，其特征在于，其活化时用的双氧水碱性溶液按其重量百分比包括：0.5％-5％的H2O2、2％-10％的NH3·H2O、85％-97.5％的去离子水。

4.根据权利要求1一种用于脂肪酶固定化的氨基化改性复合磁性纳米载体的制备方法，其特征在于，S3步骤包括：

S31：将一定量的乙醇、一定量的去离子水和一定量的Kh-550混合后，在60℃-80℃条件下搅拌10min-50min，使Kh-550充分水解；

S32:在水解后的溶液中加入活化后的磁性纳米Fe3O4-SiO2载体，搅拌反应30min-2h，待其充分反应；

S33：磁分离乙醇洗涤2次，50℃-80℃真空干燥10-30min，改性成功后得载体G0。

5.根据权利要求4一种用于脂肪酶固定化的氨基化改性复合磁性纳米载体的制备方法，其特征在于，用硅烷偶联剂(Kh-550)改性去油与活化后的载体G0按重量百分比包括：20％-50％的乙醇、20％-50％的去离子水、2％-5％的Kh-550、1％-5％活化后的磁性纳米Fe3O4-SiO2载体。

6.根据权利要求1一种用于脂肪酶固定化的氨基化改性复合磁性纳米载体的制备方法，其载体G0氨基接枝反应的S4步骤步骤包括：

S41：将载体G0加入至一定量溶剂中，超声分散1-5min，加入三口烧瓶中20℃-100℃水浴搅拌，温度恒定后加入一定量的单体和一定量引发剂(或不加)搅拌10min-2h；

S42:加入催化剂搅拌均匀，加入一定量乙二胺搅拌反应30min-2h；

S43：磁分离用乙醇洗涤2-3次，然后用去离子水洗涤2-3次，放置50℃-80℃真空干燥6h-24h得到产品G1。

7.根据权利要求6一种用于脂肪酶固定化的氨基化改性复合磁性纳米载体的制备方法，其载体G0氨基接枝反应的特征在于：按重量百分比包括1％-10％的G0、40％-80％的溶剂、0.5％-10％的单体、0.01％-0.5％的引发剂、0.5％-10％的乙二胺和0.01％-5％的催化剂。

8.根据权利要求6一种用于脂肪酶固定化的氨基化改性复合磁性纳米载体的制备方法，其载体G1特征在于：磁性纳米Fe3O4-SiO2载体表面固定了长的有机链臂。

9.根据权利要求1一种用于脂肪酶固定化的氨基化改性复合磁性纳米载体的制备方法，其特征在于，载体G1用脂肪酶的固定化时的步骤S5包括：

S51：将1-10ml的液体脂肪酶置于40-70℃的PBS缓冲液中搅拌活化10-15min；

S52:在40-70℃的条件下加入G1载体，搅拌反应1-6h；

S53：磁分离后得出氨基化改性复合磁性纳米载体。

10.根据权利要求13一种用于脂肪酶固定化的氨基化改性复合磁性纳米载体的制备方法，其特征在于，缓冲液为0.2m，PH＝6-9的PBS缓冲液，其组成为0.2m的磷酸二氢钠溶液，0.2m的磷酸二氢钾溶液，按一定比例混合。