[发明专利]靶向TEM8的嵌合抗原受体T细胞及其应用

说明书

本发明公开了属于基因工程技术领域的一种靶向TEM8的嵌合抗原受体T细胞及其应用。本发明的靶向TEM8的嵌合抗原受体T细胞可以在T细胞内表达SCFV–CD28–CD3ζ融合蛋白；该细胞经过对T细胞修饰和改造得到，能够特异性识别和杀伤TEM8高表达的肿瘤细胞，适用于相应肿瘤疾病的预防和治疗。

技术领域

本发明涉及靶向TEM8的嵌合抗原受体T细胞及其应用，属于基因工程技 术领域。

背景技术

2020年，全球恶性肿瘤新发病例和死亡病例将达到2000万和1200万，癌 症成为人类健康的第一杀手。传统的放、化疗针对的肿瘤种类有限、疗效一般、 且伴随强烈的毒副作用。肿瘤周围新生血管，肿瘤血管在肿瘤形成、生长、转移 过程中具有重要的作用，它可以为肿瘤快速增殖提供营养。肿瘤诱导的新生血管 生成是肿瘤进展中关键的一步，被称为“血管生成开关”。在肿瘤病理条件下， 血管调节失控是肿瘤恶性增长的主要促成因素，据此，以肿瘤血管为治疗靶点， 采取所谓“肿瘤饥饿疗法”，通过对肿瘤组织及周围血管的抑制，使肿瘤细胞无 法得到充分的营养供应或缺氧而死亡，进而控制肿瘤的生长和转移，已经成为肿 瘤防治的一个重要途径。

嵌合抗原受体T细胞(Chimeric antigen receptor T cell，简称：CAR-T cell)是通过基因修饰的手段，使能特异性识别靶抗原的单克隆抗体的单链可变区 (singlechain Fv domain，SCFV)表达在细胞表面，同时通过跨膜区与人工设计的 细胞胞内的活化增殖信号域相耦连。表达CAR的T细胞可通过SCFV直接识别 并结合肿瘤细胞表面的肿瘤相关抗原，CAR将信号传入T细胞内，从而发挥杀 伤肿瘤细胞的作用。

肿瘤内皮标志物(Tumor endothelia marker，TEM8)是细胞膜蛋白，具有明 显的受体与结构，在肿瘤血管内皮表达更为特异，在肿瘤血管中存在，而正常组 织中极少或不存在。更为重要的是，TEM8随后被鉴定为炭疽毒素的一种受体。 已有研究证明应用针对TEM8的抗肿瘤抗体样蛋白，即人TEM8胞外区与人 IgGFC片段的融合蛋白TEM8-FC，具有显著地抑制肿瘤生长活性和抗肿瘤效果， 说明TEM8是一个潜在的抗肿瘤靶点。因此，TEM8作为部分肿瘤细胞的高表达 抗原，可作为CAR-T细胞抗肿瘤治疗的一个理想靶点。

发明内容

为了克服现有技术中的不足，本发明提供了一种靶向TEM8的嵌合抗原受 体T细胞(Anti TEM8 CAR-T细胞)，该T细胞经过修饰和改造得到，能够特 异性识别和杀伤TEM8高表达的肿瘤细胞。

为了实现上述目的，本发明首选提供了一种靶向TEM8的嵌合抗原受体， 具体技术方案如下：

一种靶向TEM8的嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含顺序串联的抗原 结合区ScFv和信号传导区CD28-CD3ζ；其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

上述嵌合抗原受体中，所述抗原结合区ScFv的氨基酸序列如SEQ ID NO.2 所示。

上述嵌合抗原受体中，所述CD28的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

上述嵌合抗原受体中，所述CD3ζ的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

上述嵌合抗原受体中，所述抗原结合区ScFv位于胞膜，信号传导区 CD28-CD3ζ跨膜并且部分位于胞内。

本发明还提供了一种核酸分子，其编码上述嵌合抗原受体。

优选的，所述核酸分子的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

本发明还提供了一种载体，其包括上述核酸分子。

优选的，所述载体为是慢病毒表达载体。

本发明还提供了一种靶向TEM8的嵌合抗原受体T细胞，其表达上述嵌合 抗原受体。