[发明专利]靶向WT1的嵌合抗原受体T细胞及其应用

说明书

本发明公开了属于基因工程技术领域的一种靶向WT1的嵌合抗原受体T细胞及其应用。所述靶向WT1的嵌合抗原受体，包含顺序串联的抗原结合区ScFv和信号传导区CD28‑CD3ζ；其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明提供的靶向WT1的嵌合抗原受体T细胞对于表达TEM8的癌细胞具有高效的肿瘤杀伤活性，尤其是对于表达WT1的癌症，例如于表达WT1的慢性骨髓性白血病和淋巴瘤。

技术领域

本发明涉及靶向WT1的的嵌合抗原受体T细胞及其应用，属于基因工程技术领域。

背景技术

传统的肿瘤治疗手段如手术、放化疗使恶性肿瘤患者的生存期和生存质量得到了很大改善，但存在毒副作用大、治疗效果难以进一步提高等诸多问题。近几年在细胞过继治疗领域的发展也取得令人瞩目的成果，在ACT治疗领域中，研究最大的热点是基因修饰的抗原特异性T细胞过继治疗。单纯T细胞过继免疫治疗的诸多缺陷：缺少免疫原性强、特异性高的抗原，存在免疫逃逸，肿瘤的异质性，肿瘤微环境的免疫抑制。利用靶向CD19和CD20修饰的T细胞进行过继输注，治疗血液系统恶性肿瘤是目前临床研究的热点。

CAR(Chimeric Antigen Receptor，嵌合抗原受体)由抗原识别区，铰链区，跨膜区和信号传导区组成。目前对CAR的结构设计主要集中在：胞外抗原的完善，铰链区的长短和空间构象的研究；信号转导和共刺激分子序列的改进等的探究。旨在构造一种更加安全，靶向性更好，作用更加持久，副作用更小，功能更加完善的CAR的结构。

WT1基因，1972年首次由Knudson和Strong发现其是定位于11号染色体短臂，长约50kb，有10个外显子，转录产物长约3kb的基因。WT1蛋白的主要功能是调节基因的转录，可以抑制胰岛素样生长因子Ⅱ、集落刺激因子、PAx2血小板衍生生长因子A(PDGF-A)和转化生长因子β1(TGFβ1)等多种生长因子及受体基因的转录。如果WT1基因突变功能丧失，可使细胞继续分裂，而失去正常分化，导致癌变。因此，WT1基因启动子的突变在Wilms'瘤的发生发张中发挥着不可替代的作用。

WT1基因具有组织特异性，主要在胎儿肾脏、睾丸及卵巢等组织中表达，同时还参与人类的造血调控，参与造血细胞增殖、分化、凋亡等各个过程的调控。在白血病的形成中也发挥一定作用，已有人发现WT1基因在多种白血病中均有异常高表达。1992年Miwa等首先报道了70％～80％的急性白血病患者中WT1高度表达。随后，Miyagi等检测到WTl在急性髓系白血病(acutemyeloid leukemia，AML)、淋巴瘤、骨髓增生异常综合征异常地表达。WT1在胎脾脏细胞及造血祖细胞中高度表达，在分化过程中与许多在造血细胞增殖、分化及凋亡中起重要作用的因子相互作用。Gaidzik等检测了617例AML患者，其中78例(12.6％)被鉴定存在WTl突变，并且WTl突变的往往年龄更小、乳酸脱氢酶水平较高、白细胞数较高、完全缓解率更低、更容易复发、预后差。目前WTl已经成为一个患者复发和存活的独立的预测指标，在预测复发方面要优于疾病的分期。

近年来，WT1已经成为白血病基因治疗和特异性免疫治疗的新靶点，用于制备白血病疫苗、白血病细胞的体内抗原特异性治疗及体外净化，利用反义RNA技术进行反义基因治疗也得到了较快发展。因此，WT1作为多种肿瘤细胞的高表达抗原，可作为CAR-T细胞抗肿瘤治疗的一个理想靶点。

发明内容

为了克服现有技术中的不足，本发明提供了一种靶向WT1的嵌合抗原受体T细胞(Anti WT1 CAR-T细胞)，该T细胞经过修饰和改造得到，能够特异性识别和杀伤WT1高表达的肿瘤细胞。

为了实现上述目的，本发明首先提供了一种靶向WT1的嵌合抗原受体，具体技术方案如下：

一种靶向WT1的嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含顺序串联的抗原结合区ScFv和信号传导区CD28-CD3ζ；其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。