[发明专利]一种牛乳中乳过氧化物酶的快速检测方法

说明书

本发明的乳过氧化物酶的快速检测方法，基于酶促反应原理直接利用乳中具有活性的乳过氧化物酶分解过氧化氢与淀粉和碘化钾反应立即变成蓝色的特点，进行检测分析，不需要采用现有检测技术中乳品的前处理步骤、大型仪器设备以及复杂的检测操作步骤，简便快捷高效。进一步通过LPO标准品以及乳品热处理标准样，建立标准比色卡或标准对照表格，将待测乳品的显色颜色与标准比色卡和/或标准对照表格对比，可以得出乳品中LPO活性的区间范围，以及乳品的热处理程度。

技术领域

本发明涉及一种液态乳中，例如牛乳中，乳过氧化物酶的快速检测方法，更具体地说是采用碘化钾为化学显色试剂，快速定性或半定量检测巴氏杀菌乳、超高温灭菌乳等液态乳中乳过氧化物酶活性的方法，属于乳制品检测分析领域。

背景技术

乳过氧化物酶(lactoperoxidase,LPO，EC 1.11.1.7)作为乳液中的内源酶之一，广泛存在于哺乳动物的乳腺、唾液腺、泪腺及其各自分泌物(乳、唾液、眼泪)中。LPO有较高的热稳定性，常用的巴氏杀菌法，即经72℃持续15s或63℃持续30min的巴氏消毒，并不能使牛奶中的LPO完全失去活性，而在78℃下持续15s之后才能使LPO彻底失活。因此，LPO可作为超巴氏消毒的评定指标之一，即，可以通过检测LPO活性来了解乳品的热处理情况。作为评价巴氏杀菌乳热加工工业的重要指标，国际上常把乳过氧化物酶阳性作为牛奶巴氏杀菌工艺的上限。例如，欧盟标准要求巴氏杀菌乳中LPO阳性，LPO阴性的牛奶需要标识为高温巴氏乳。

LPO可催化以下反应：2HA+H₂O₂→A+2H₂O，其中HA是可氧化底物或氢供体。目前，国内外有关LPO检测方法的研究报道很多，发色或发光的还原剂可用于测定过氧化物酶，基于颜色反应，利用酶促反应的原理，在过氧化物酶存在的情况下，有色物质产生颜色，从而借助分光光度计测定酶活大小。最常用于测定LPO的底物是3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸；但定性分析LPO时，用愈创木酚或对苯二胺作为电子供体。2,2'-偶氮-二(3-苯甲酸乙酯噻唑啉-6-磺酸盐)磷酸氢二铵盐也是一种适合LPO的电子供体的底物，这种底物最初是用于测定宫颈粘液中过氧化物酶活性，但也适用于测定乳及乳制品中LPO活性。Kumar和Bhatia使用2,2'-偶氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(ABTS)作为显色底物来标准化分光光度法来测量牛奶中的LPO活性。Pinho等利用愈创木酚作为检测底物来研究高压处理对LPO变性的影响，此方法虽然操作简单但准确性和灵敏度较低。使用3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)检测人乳中的LPO活性(Shin等，2000)，试验操作较为繁琐，准确性较高。此外，还有利用澄清剂、Herluy比色法、以苯胺类为底物等检测LPO。现有的诸多检测方法虽然灵敏度较高，准确性和重复性较好，但大多数检测方法必须对液体乳样品进行预处理，检测程序复杂，需要高技能的实验室技术人员和复杂的设备，操作并不简便，需要花费一定时间，不适合于现场快速检测。

在液体乳的现场快速检测中，仍然需要能够快速定性或半定量测定液体乳中LPO存在与否，以判定液体乳的加热程度，以及乳中LPO的含量范围，以指导液态乳的收购、进行深加工前的热处理保存方法等。

发明内容

本发明的目的是提供一种液体乳中，例如牛乳中，乳过氧化物酶的快速检测方法及其检测试剂、检测试剂盒，其可用于生乳、巴氏杀菌乳、超高温灭菌乳等液态乳中乳过氧化物酶活性的定性或半定量快速检测，以满足乳制品加工及乳过氧化物酶检测分析的需要。

为实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

第一个方面是提供快速定性或半定量检测乳中过氧化物酶活性的方法。

一种快速定性或半定量检测乳中过氧化物酶活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：取待检测液态乳，加入淀粉、碘化钾和过氧化氢，摇匀反应。