[发明专利]干细胞生物活性蛋白及其制备、应用有效
| 申请号： | 201810463030.4 | 申请日： | 2018-05-15 |
| 公开（公告）号： | CN108642003B | 公开（公告）日： | 2020-12-08 |
| 发明（设计）人： | 吴道贫;陶然;赖小华;李文禄 | 申请（专利权）人： | 广州准优生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775;C12P21/00;C07K1/34;A61K8/64;A61Q19/00 |
| 代理公司： | 广州华进联合专利商标代理有限公司 44224 | 代理人： | 万志香 |
| 地址： | 510000 广东省广州市开发区国*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 干细胞 生物 活性 蛋白 及其 制备 应用 | ||
1.一种干细胞生物活性蛋白的制备方法，其特征在于，该制备方法包括：
获取间充质干细胞；
用添加有诱导试剂的细胞培养基对所述间充质干细胞进行诱导培养，得培养物；所述诱导试剂由IL-1β和EGF组成；
去除所述培养物中的细胞体及细胞碎片得干细胞生物活性蛋白粗提液；
对干细胞生物活性蛋白粗提液进行浓缩纯化，得干细胞生物活性蛋白；
所述间充质干细胞的组织来源为羊胎盘组织或者羊脐带组织；
所述IL-1β在所述细胞培养基的浓度为1～30ng/mL、所述EGF在所述细胞培养基的浓度为10～100ng/mL。
2.根据权利要求1所述的干细胞生物活性蛋白的制备方法，其特征在于，所述IL-1β在所述细胞培养基的浓度为10ng/mL、所述EGF在所述细胞培养基的浓度为10ng/mL。
3.根据权利要求1或者2所述的干细胞生物活性蛋白的制备方法，其特征在于，所述浓缩纯化采用超滤，超滤包括以质量浓度为3～8%的PBS溶液为纯化溶液，超滤时间为24～48h，超滤中更换纯化溶液的次数为2～3次。
4.根据权利要求3所述的干细胞生物活性蛋白的制备方法，其特征在于，所述超滤包括以质量浓度为15～25%的PEG6000溶液为纯化溶液超滤3～5h。
5.根据权利要求1或者2所述的干细胞生物活性蛋白的制备方法，其特征在于，所述诱导培养的时间为45～55h。
6.根据权利要求1或者2所述的干细胞生物活性蛋白的制备方法，其特征在于，所述细胞培养基为DMEM培养基。
7.根据权利要求1或者2所述的干细胞生物活性蛋白的制备方法，其特征在于，所述间充质干细胞的获取步骤包括：
挑选新鲜健康的离体组织，充分清洗并切成小块，去除血管和粘膜组织，剪成组织碎片；
将组织碎片于DMF12培养液中进行传代培养、清洗，即得。
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