[发明专利]一种抗CT83蛋白单克隆抗体及杂交瘤细胞株

说明书

本发明公开了一种抗CT83蛋白单克隆抗体及杂交瘤细胞株。本发明通过基因工程技术制备了高纯度的CT83重组蛋白，用该重组蛋白免疫Balb/c小鼠，筛选出产生CT83蛋白抗体最稳定的杂交瘤细胞株，其保藏编号为CCTCC NO:C201834。该杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体具有高度特异性和亲和力，能够检测肿瘤细胞中的CT83蛋白。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种抗CT83蛋白单克隆抗体及杂交瘤细胞株。

背景技术

肿瘤/睾丸抗原(cancer/testis antigen, CTA)是一类肿瘤抗原，只表达于正常睾丸、胎盘组织以及肿瘤组织中，有高度的组织限制性。它们与肿瘤的发生、发展以及肿瘤的转移等密切相关。大部分肿瘤-睾丸抗原都具有免疫原性，可诱发机体产生细胞免疫和体液免疫，从而发挥抗肿瘤作用。正因为CTA在正常的体细胞中低表达，而在多种肿瘤组织中过表达，使其成为靶向免疫治疗的热点，其中又以 MAGE-A 家族和 NY-ESO-1 的研究最为突出，它们过表达可诱导强大的T细胞反应，成为潜在的免疫治疗靶点。而另外一种新的肿瘤睾丸抗原 CT83最近也成为潜在的靶标。CT83又名KK-LC1，CXorf61，最先是从同种异体的肺癌细胞株来源的cDNA文库中筛选出来的，属于CTAs，后证实其编码基因位于Xq22，可编码合成113个氨基酸。

目前对CT83蛋白的研究甚少，其结构和功能尚未阐明，而且没有特异性检测的单克隆抗体。

发明内容

本发明针对现有技术中没有特异性检测新的肿瘤睾丸抗原 CT83蛋白这一潜在靶标的单克隆抗体的问题，提供一种可被广泛应用，可检测肿瘤组织中CT83蛋白的单克隆抗体及杂交瘤细胞株，该单克隆抗体可直接用于肿瘤细胞和血清中CT83蛋白的检测，有助于肿瘤免疫逃逸机制等的研究。

本发明通过分析获得人CT83蛋白的主要抗原表位区，克隆该区段基因；将克隆的基因插入表达载体，构建重组表达载体；用重组表达载体转化感受态大肠杆菌，诱导表达，纯化获得高纯度的CT83重组蛋白；用该重组蛋白免疫Balb/c小鼠，取其脾淋巴细胞与小鼠SP2/0骨髓瘤细胞融合，建立杂交瘤细胞系，从中筛选出产生抗CT83蛋白单克隆抗体最稳定的杂交瘤细胞株，其所产生的抗体即为所需的单克隆抗体。该单克隆抗体具有高度特异性和亲和力，制备方法简单高效；可通过Western Blot、免疫组织化学染色技术直接用于肿瘤细胞中CT83蛋白含量的检测，也可用于制备ELISA检测试剂盒等。

本发明的第一个目的是提供一种杂交瘤细胞株，其保藏编号为CCTCC NO:C201834。

优选，所述的杂交瘤细胞株是采用SEQ ID NO.1所示的蛋白与已知标签形成的融合蛋白作为抗原免疫Balb/c小鼠制备得到的。

本发明的第二个目的是提供一种由保藏编号为CCTCC NO:C201834的杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体。

优选，所述的单克隆抗体是对SEQ ID NO.1所示的蛋白能特异性结合的单克隆抗体。

本发明的第三个目的是提供所述的单克隆抗体在制备检测CT83蛋白含量试剂盒中的应用。

优选，所述的单克隆抗体在制备检测肿瘤组织中CT83蛋白中的应用。

优选，所述的CT83蛋白的第21-113号氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明利用大肠杆菌表达系统成功表达了人CT83蛋白的主要抗原表位区的基因，并且得到了高纯度的表达蛋白，进而用于单克隆抗体的制备，并得到了一组特异性更强，亲和力更高的抗人CT83蛋白单克隆抗体。该抗体可直接用于肿瘤细胞和血清中CT83蛋白的检测。

本发明的杂交瘤细胞株10 605A于2018年2月9日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉市武汉大学，其保藏编号为CCTCC NO:C201834，分类命名为杂交瘤细胞株10 605A。