[发明专利]一种BSA-Au/Ag NCs/OPD/HRP比例型荧光传感器的制备方法和用途

说明书

本发明属于分析化学领域，提供了一种BSA‑Au/Ag NCs/OPD/HRP比例型荧光传感器的制备方法和用途。该发明包括(1)制备BSA‑Au/Ag NCs/OPD/HRP比例型荧光传感器；(2)尿酸酶催化尿酸生成H₂O₂；(3)用BSA‑Au/Ag NCs/OPD/HRP比例型荧光传感器检测H₂O₂，从而检测尿酸含量。与现有技术相比，BSA‑Au/Ag NCs/OPD/HRP比例型荧光传感器不仅具有荧光传感器时间短，操作简单，无需处理前期样品，无毒性，成本低等优点，还较于单荧光传感器有更高的灵敏度和准确度。血清中尿酸水平与人体疾病息息相关，发明一种比例型荧光传感器检测尿酸具有重要的意义。

技术领域

本发明属于分析化学领域，涉及一种BSA-Au/Ag NCs/OPD/HRP比例型荧光传感器的制备方法和用途。

背景技术

尿酸(2，6，8-三羟基嘌呤)是人体核蛋白和核酸中嘌呤分解代谢的最终产物。当机体出现代谢紊乱时，会引起嘌呤过量，嘌呤代谢产生的尿酸也相应增加。一般来说，尿酸水平过高会引起人类的相关疾病，例如痛风，肾脏疾病和心血管疾病等。因此，在临床诊断领域中分析尿酸来早期诊断嘌呤代谢疾病是非常必要的。

迄今为止，人血清中尿酸的检测工具很多，如酶法，尿酸传感器，电化学法，高性能液相色谱等。与以前报道的检测尿酸的方法相比，基于金属纳米材料的荧光传感器具有检测时间短，操作简单，无需处理以往样品，无毒性，成本低等优点。然而，这种基于金属纳米材料检测策略常采用单荧光测试，易受样品的环境条件和光检测器的漂移等因素的影响，这限制了检测的灵敏度和准确度。幸运的是，因为比例型荧光传感器允许在两个不同的波长下同时测量荧光强度，可以有效避免背景荧光的潜在干扰，所以它的检测灵敏度更高和准确性更强。目前，使用比例型荧光检测方案的报道已经有很多。因此，比例型荧光传感器策略的发展具有重要的意义，而且通过比例型荧光传感器对血清中尿酸的检测并无报道。

发明内容：

本发明的目的是建立一种BSA-Au/Ag NCs/OPD/HRP比例型荧光传感器，并用于检测血清中的尿酸。

一种BSA-Au/Ag NCs/OPD/HRP比例型荧光传感器的制备方法，包括如下步骤：

(1)制备牛血清蛋白--金银合金纳米簇(BSA-Au/Ag NCs)水溶液：

将4mL的氯金酸(10mM)和1mL的硝酸银(10mM)混合(金银摩尔比为4:1)，加入到5mL的牛血清蛋白溶液(0.75mM)中，强有力搅拌混合5分钟后，用氢氧化钠调节溶液的酸碱度，然后置于37℃的恒温油浴锅反应12小时，反应结束后用超纯水透析纯化48小时，得到牛血清蛋白--金银合金纳米簇水溶液；

牛血清蛋白为保护剂和还原剂。

(2)建立BSA-Au/Ag NCs/OPD/HRP比例型荧光传感器：

将步骤(1)得到的BSA-Au/Ag NCs水溶液、OPD、HRP加入到稀释液磷酸盐缓冲液中，得到BSA-Au/Ag NCs/OPD/HRP比例型荧光传感器。

步骤(2)中，所述BSA-Au/Ag NCs/OPD/HRP比例型荧光传感器中，BSA-Au/Ag NCs的浓度为20nM，OPD的浓度为50～300μM；HRP的浓度为10ng/mL；所用磷酸盐缓冲液浓度为10mM，pH＝6.0。

HRP为催化OPD的酶。

将本发明制备的BSA-Au/Ag NCs/OPD/HRP比例型荧光传感器用于检测尿酸的用途，具体检测方法，包括如下步骤：

(1)尿酸酶催化尿酸生成H₂O₂；