[发明专利]一种提高牛性控冻精体外受精能力的方法

说明书

本发明提出了花青素和吡咯喹啉醌在提高性控冻精体外受精能力方面的用途，并提出了添加花青素和吡咯喹啉醌的洗精液和受精液。本发明在牛性控冻精解冻、获能过程中，向洗精液和受精液中分别都加入花青素和吡咯喹啉醌，来处理牛性控冻精，而后进行体外受精。结果表明，牛性控精液的卵裂率、囊胚率得到显著性提高，并显著超过了同头公牛未分离冻精的体外受精效率，具有广泛的应用前景，值得推广。

技术领域

本发明涉及人工体外受精领域，具体涉及一种提高性控冻精体外受精能力的方法。

背景技术

在养殖业中，性别控制技术能够使人们获得预期性别的后代，进而提高养殖业效益和育种进度，因此该技术具有十分重要的意义。Johnson等在1989 年开发的精子流式细胞仪分离技术，已经被成功用于奶牛X、Y精子的分离。目前，在奶牛人工授精过程中采用性控冻精，可控制母牛出生率在90％以上(Mikkola M,Andersson M,Taponen J.Transfer ofcattle embryos produced with sex-sorted semen results in impaired pregnancyrate and increased male calf mortality[J].Theriogenology,2015,84(7):1118-22.)。然而，青年牛采用奶牛性控冻精人工授精后受胎率约为40％，远低于常规冻精(70％左右)(郝海生, 赵明礼,朱化彬等.性控冷冻精液人工授精对青年奶牛繁殖性能的影响[J]. 畜牧与兽医,2016,48(8):52-54.)。同时，奶牛性控冻精用于体外受精时，卵裂率通常为40％、囊胚率为10％左右，而常规冻精体外受精后卵裂率通常在80％、30％以上(Zhao XM,Ren J J,Zhao S J,et al.Apoptosis-like events and in vitro fertilizationcapacity of sex-sorted bovine sperm[J].Reprod Domest Anim,2014,49(4):543-549.)。

研究表明，在性控精子分离过程中，需要经过稀释、染色、激光照射、冷冻等步骤，导致性控精子受精能力降低。因此，如何提高性控冻精活力和受精能力，已经成为该领域的研究热点。

发明内容

本发明针对现有技术中性控冻精受精能力降低的问题，提供一种在性控冻精解冻、获能过程中的保护措施，以保护性冻精免受ROS的影响，进而提高牛性控冻精活力和体外受精的方法。本发明的一个目的是提供花青素和吡咯喹啉醌在提高性控冻精体外受精能力的用途。

本发明的另一个目的是提供一种受精液，该受精液溶液中还含有花青素和吡咯喹啉醌。

本发明的另一个目的是提供一种洗精液，该洗精精液溶液中还含有花青素和吡咯喹啉醌。

最后，本发明还提供一种利用含有花青素和吡咯喹啉醌的洗精液和受精液处理性控冻精，从而提高性控冻精体外受精能力的方法。

具体的说，本发明所述的性控冻精是牛性控冻精。

进一步的，本发明所述的洗精液可采用本领域常用的各种洗精液加入花青素和吡咯喹啉醌。其中花青素的浓度为10^-5M-10^-1M，所述吡咯喹啉醌的浓度为50μM-5mM；

优选的，所述花青素的浓度为10^-3M，所述吡咯喹啉醌的浓度为500μM。

进一步优选的，所述洗精液是BO液+3.38mg/mL咖啡因，还含有浓度为10^-5M-10^-1M的花青素，以及浓度为50μM-5mM的吡咯喹啉醌。

更进一步优选的，所述洗精液中花青素的浓度为10^-3M，所述吡咯喹啉醌的浓度为500μM。