[发明专利]一种淡水沙梨茎段组织快速繁殖方法

权利要求书

1.一种淡水沙梨茎段组织快速繁殖方法，其特征在于其方法步骤如下：

步骤1，不定芽诱导：选取淡水沙梨的刚萌发的新梢剪下去叶后作为快速繁殖材料，经0.1%～0.3%的氯化汞溶液中消毒10～16分钟，然后用无菌水冲洗5～6次，经无菌滤纸吸干水分后，切成具有1～3个芽的带芽茎段作为外植体接种到诱导培养基上，暗培养5～10天，然后转入光培养至萌发新芽；

步骤2，丛生芽诱导和增殖培养：将步骤1培养的高为1.0～3.0cm的新芽切下转接到增殖培养基上进行增殖培养，接种后置于光照强度为1500～2000Lx，培养温度为23～26℃条件下每天光照10～16小时，培养25～35天后即得丛生芽苗；

步骤3，生根诱导：将步骤2培养得到丛生芽切成单株芽苗接种到生根培养基上进行生根诱导，接种后先在23～26℃条件下暗 培养5～14天，然后置于光照强度为1500～2000Lx，培养温度为23～26℃条件下每天光照10～16小时，培养至生根；

步骤1所述外植体在进行不定芽诱导之前需要进行预处理，具体处理方式为将从野外采集的5～10cm长的幼嫩新梢用自来水冲洗干净表面污垢、灰尘、虫卵等杂物，再用饱和洗衣粉溶液浸泡5～10分钟，换净水漂洗3～5次后置于流动自来水冲洗5～12小时，直至冲洗干净后置于8～10℃冰箱中备用；

步骤1所述诱导培养基以MS为基本培养基，所述基本培养基每升含6-苄氨基腺嘌呤0.5～3.0mg， 1-萘乙酸0.01～0.20mg，L-半胱氨酸1.0～6.0mg，生物素0.01～0.04mg，核黄素1.0～3.0mg，D-泛酸钙0.1～0.2mg，抗坏血酸1.0～4.0mg，以及蔗糖质量浓度为2.5～3.0%，琼脂质量浓度为0.4～0.7%；

步骤2所述增殖培养基以MS为基本培养基，所述基本培养基每升含6-苄氨基腺嘌呤1.5～5.0mg， 1-萘乙酸0.1～0.5mg，赤霉素0.1～3.0mg，L-半胱氨酸1.0～6.0mg，核黄素2.0～3.0mg，D-泛酸钙0.2～0.4mg，以及蔗糖质量浓度为2.5～3.0%，琼脂质量浓度为0.4～0.7%；

步骤3所述生根培养基以1/2MS为基本培养基，所述基本培养基每升含吲哚丁酸0.2～1.5mg，1-萘乙酸0.2～1.5mg，核黄素2.0～3.0mg，D-泛酸钙0.2～0.4mg，以及蔗糖质量浓度为2.5～3.0%，琼脂质量浓度为0.4～0.7%。

2.根据权利要求1所述的一种淡水沙梨茎段组织快速繁殖方法，其特征在于：步骤1所述带芽茎段长度为0.5～2cm。

3.根据权利要求2所述的一种淡水沙梨茎段组织快速繁殖方法，其特征在于：步骤1所述光培养的条件为光照强度1500～2000Lx，培养温度23～26℃，光照时长12～16小时。

4.根据权利要求1所述的一种淡水沙梨茎段组织快速繁殖方法，其特征在于：步骤2所述丛生芽苗培养至高度为1.0～3.0cm时在无菌条件下切成单株芽苗再转接至增殖培养基进行增殖培养，接种后置于光照强度为1500～2000Lx，培养温度为23～26℃条件下每天光照10～16小时，培养25～35天。

5.根据权利要求4所述的一种淡水沙梨茎段组织快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤1～3中所用的培养基pH值均为5.60～5.80。