[发明专利]核酸提取仪

说明书

本发明公开了一种核酸提取仪，具有操作空间，操作空间内具有磁棒‑磁棒套模块和驱动传动机构，驱动传动机构使磁棒‑磁棒套模块往复或移动，操作空间内有裂解区域和前处理区域，裂解区域和前处理区域相互独立，磁棒‑磁棒套模块在裂解区域和前处理区域往复。本发明提供了一种核酸提取步骤简化、提取耗时短、提高核酸提取成功率且核酸提取量损失少的核酸提取仪。

技术领域

本发明涉及核酸提取领域，更具体的说，它涉及一种核酸提取仪以及提取方法。

背景技术

核酸，例如DNA或者RNA，的提取目前主要采用离心柱法和磁珠法两种提取方法。传统的离心柱技术也应用膜进行核酸纯化，它的膜的原理属于硅吸附方法，这种膜只对核酸有较强的亲和力和吸附力。操作时首先应用蛋白酶在56℃温度条件下对样本进行裂解，然后将裂解液加入柱子中离心，核酸被吸附于膜上，而其他杂质被甩出，最后用洗脱液将核酸洗脱下来。此方法提取效果好，但是裂解时需要加热，核酸纯化时需要多次离心，整个提取过程耗时2个小时左右，其成本高、操作复杂、耗时长、依赖实验室环境，并难以提取易降解的RNA。

磁珠法核酸提取是以纳米生物磁珠为载体的一种新型核酸提取技术，核酸分子可与磁珠表面的硅羟基发生特异性识别与结合，在外部磁场的作用下发生聚集或分散，从而进行核酸分离纯化。目前，对于DNA的提取，磁珠法核酸提取一般包括裂解、结合、洗涤、洗脱四个主要步骤，每一步骤又可由多种不同的方法单独或联合实现。如果对于RNA的提取，相比DNA的提取，更为复杂，目前任然采用过柱的方法进行提取和纯化，同时需要加入防治RNA降解的诸多酶，传统的RNA的提取方法耗时长，所用的材料多，总体成本高。

磁珠法核酸提取仪器可分为：移液式和磁棒式。移液式核酸提取是通过转移反应溶液来实现核酸的提取纯化，其步骤包括：向样本加入裂解液，吹打混匀，反复磁珠吸附、移走裂解液、加入洗涤液洗涤磁珠、对磁珠吸附、移走洗涤液、加入洗脱缓冲液等操作，从而得到纯化的核酸。然而移液式仪器有一个致命的缺陷，为了尽可能彻底地除废液，移液吸头需要伸入到深孔板底部，如果吸头靠磁珠太近，会使得磁珠和废液一起吸掉，从而导致每次这样吸取废液时会有小部分残液留在管底部，从而影响后续的洗脱效率和核酸的扩增，例如PCR扩增反应的成功率。

磁棒式核酸提取仪器采用磁棒法的磁性分离方式，通过特制的磁棒套进行转移磁珠同时转移样本，磁珠定向团聚在磁棒表面的专门的磁棒套上，通过精确的运动来实现磁珠从样本裂解液到洗涤液在到洗脱液，从而完成核酸测自动化提取过程。具体操过程如下：

步骤1、加样本：撕开封膜，加入液体样本到裂解液孔中；

步骤2、裂解/结合：裂解液裂解样本(反应一段时间，期间底部会加热加速裂解)，期间磁棒套(只有磁棒套、无磁棒)插入到液面下进行上下振荡混匀，使核酸悬浮在裂解液中；裂解完成后，带磁棒的磁棒套伸入磁珠孔将磁珠吸起，转移到裂解液孔中，磁棒取出，磁棒套上下振荡混匀使得磁珠均匀分散到裂解液中吸附核酸，静置一段时间后，磁棒插入然后静置或上下振荡至磁珠都吸附在磁棒套上；

步骤3、盐洗：将从裂解液中吸附磁珠转移到盐洗的孔中，磁棒取出，磁棒套上下振荡混匀使得磁珠均匀分散到盐洗液中，静置一段时间后，磁棒插入然后静置或上下振荡至磁珠都吸附在磁棒套上；

步骤4、洗涤：将盐洗后的磁珠取出，转移到洗涤液中，磁棒套上下振荡混匀使得磁珠均匀分散到洗涤液中，静置一段时间后，磁棒插入然后静置或上下振荡至磁珠都吸附在磁棒套上；

步骤5、洗脱：将洗涤后的磁珠取出，磁棒取出，磁棒套上下振荡混匀使得磁珠均匀分散到洗脱液中，一般加热至65℃/5min静置、加热使核酸与磁珠脱离，在较高的温度下、磁棒插入然后静置或上下振荡至磁珠都吸附在磁棒套上，回收磁珠，如此，核酸提取仪的工作完成。

之后，将反应板从一起中取出，手工用移液器将含有核酸的洗脱液转移。