[发明专利]利用黄孢原毛平革菌静止固体发酵农业废弃物产生厚垣孢子并积累油脂的方法

权利要求书

1.利用黄孢原毛平革菌静止固体发酵农业废弃物产生厚垣孢子并积累油脂的方法，其特征在于具体过程为：将黄孢原毛平革菌通过静止固体培养形成菌垫并产生富含油脂的厚垣孢子，固体发酵培养基由以下成分组成：玉米秸秆粉碎物400-600g、麦麸100-200g、(NH₄)₂SO₄ 60.0g、MnSO₄·5H₂O 20.0g、MgSO₄·7H₂O 20.0g、CaCl₂ 15.0g、维生素B1 0.2g、吐温802.0mL、补水至1Kg。

2.根据权利要求1所述的利用黄孢原毛平革菌静止固体发酵农业废弃物产生厚垣孢子并积累油脂的方法，其特征在于具体步骤为：

（1）培养基配制

马铃薯葡萄糖琼脂培养基：马铃薯200g/L、葡萄糖15.0g/L、FeSO₄ 2.0g/L、CuSO₄ 0.5g/L、K₂HPO₄ 1.0g/L、KH₂PO₄ 1.0g/L、琼脂20g/L，pH自然；

马铃薯葡萄糖培养基：将200g去皮马铃薯切成小块，加水煮沸30min，用8层纱布过滤，加葡萄糖15.0g，再用蒸馏水补足至总体积1000mL，调pH值至7.0；

固体发酵培养基：(NH₄)₂SO₄ 60.0g、MnSO₄·5H₂O 20.0g、MgSO₄·7H₂O 20.0g、CaCl₂ 15.0g、维生素B1 0.2g、吐温80 2.0mL，加水溶解，将pH调至4.5，再加入玉米秸秆粉碎物400-600g和麦麸100-200g，蒸馏水补足至总质量1Kg；

（2）真菌油脂发酵

菌株活化：将美国典型培养物保藏中心保藏的菌株编号为ATCC24725的黄孢原毛平革菌菌种接种至马铃薯葡萄糖琼脂培养基斜面上，在30℃恒温培养箱中培养2d；

分生孢子悬液的制备：将活化后的斜面分生孢子用无菌水制成浓度为5×10⁷个/mL的分生孢子悬液；

菌丝球的液体培养：将1mL分生孢子悬液接种至装有200mL马铃薯葡萄糖培养基的三角瓶中，置于恒温摇床在30℃、150rpm条件下震荡培养48h获得菌丝球；

静止固体发酵：在无菌条件下称取0.5g菌丝球接入装有灭菌固体发酵培养基的三角瓶中，并使菌丝球分散铺在固体发酵培养基表面，30℃恒温静止培养，2d后菌垫形成，菌垫内出现大量厚垣孢子且厚垣孢子开始积累真菌油脂，在恒温培养箱中继续静置培养6-7天得到富含真菌油脂的厚垣孢子，该真菌油脂可用于生产生物柴油。

3.根据权利要求2所述的利用黄孢原毛平革菌静止固体发酵农业废弃物产生厚垣孢子并积累油脂的方法，其特征在于：静止固体发酵过程中在恒温培养箱中于15-35℃继续静置培养6-7天得到富含真菌油脂的厚垣孢子。