[发明专利]肝病T细胞功能的检测评估方法及试剂盒

说明书

本发明公开了一种肝病相关T细胞功能的检测评估方法，包括步骤：1)利用单个细胞通过流式细胞仪，使用抗细胞因子抗体与细胞表面或胞内特定标记组合，即可检测不同细胞因子的分泌，根据不同的标记获取结果；同时采用特殊化学与抗体选择，该特殊化学与抗体为特异性与细胞表面分泌的细胞因子结合的抗体，该抗体带有颜色的荧光标记化合物，能清楚区分无分泌该种细胞因子的免疫细胞；2)利用全新的大数据生物统计学分析技术，对每一个细胞因子对造成整体免疫功能的贡献/作用/影响进行判读。本发明还公开了一种肝病T细胞功能检测试剂盒。本发明的试剂盒能够有效检测T细胞的总体功能。

技术领域

本发明属于生物医学和免疫检验领域，涉及一种乙肝肝病相关的总体T细胞功能检测和评估方法，具体地说，涉及一种总体T细胞功能的检测评估方法，以及用于该方法的试剂盒。

背景技术

虽然乙肝疫苗推广已有30余年，目前仍有2.4亿乙肝感染者，每年约有100万人死于乙肝肝病，我国占有9300万，占全球38.75％。乙肝病毒(HBV)是非细胞毒性的嗜肝病毒，肝细胞炎症损伤不是病毒直接作用引起，而是由宿主免疫反应所介导。同时，机体清除病毒也主要依赖免疫反应，其中T细胞免疫起重要作用(见图1)。T细胞分为CD4⁺T细胞和CD8⁺T细胞，其功能由T细胞活化性因子和衰竭因子水平决定，活化性因子主要有：白介素2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)；衰竭分子有：PD-1、CTLA-4、LAG3、TIM3、2B4(图2)。

随着HBV进入肝脏，大量炎症细胞也随之涌入肝脏，尤其是HBV特异性及非特异性T细胞，通过分泌细胞因子或通过直接细胞裂解作用进一步清除病毒，但在清除病毒的同时也引起受感染肝细胞凋亡、坏死，临床上即表现为转氨酶升高、HBV-DNA下降、清除。急性HBV感染时，机体的固有免疫及适应性免疫能够产生大量的抗病毒因子及足量、功能全面的T细胞，以至完全清除病毒。HBV慢性感染者体内却不能产生强烈的固有免疫和适应性免疫反应，造成后续大量的HBV抗原在血液及肝组织中蓄积，进一步引起T细胞功能缺失、衰竭和凋亡，T细胞衰竭是机体不能清除病毒、造成慢性持续感染的主要原因。因此，T细胞功能评估至关重要。

目前缺乏用于有效评估乙肝T细胞总体功能的临床检测试剂盒。

随着生命组学的发展，免疫系统的相关技术不断进步，从70年代开始的免疫球蛋白、补体等测定，能粗略和间接地估计机体的免疫状态，已经逐步被淋巴细胞亚群、细胞因子的检测替代，代表性的检测手段包括：

1)基于DNA检测的生物学方法，如PCR、RNA印迹、原位杂交等技术，这类方法能够对单一细胞免疫因子进行检测，并研究其调控通路；

2)生物活性检测方法，如ELISA、ELISPOT等，这类方法只对单一细胞或者单一免疫细胞分泌因子进行检测，而非对某一群免疫细胞的平均细胞因子水平进行检测；

3)流式细胞技术和液态芯片检测：目前较为精准的检测技术，可对多个细胞因子进行检测，根据不同细胞因子水平对免疫状态进行预估；然而，带有较强的主观性。

发明内容

本发明的一个目的是针对以上要解决的技术问题，提供一种较为准确、高效的T细胞功能的检测评估方法。

本发明的另一个目的是提供一种准确、高效的肝病T细胞功能检测试剂盒。

本发明的目的是采用以下技术方案来实现的。

本发明提供了一种肝病T细胞功能的检测评估方法，其包括：

1)利用单个细胞通过流式细胞仪，使用抗细胞因子抗体与细胞表面或胞内特定标记组合，检测不同细胞因子的分泌，根据不同的标记获取结果；所述抗细胞因子抗体带有颜色的荧光标记的化合物，能够清楚地区分无分泌相应细胞因子的免疫细胞；