[发明专利]一种保持克氏原螯虾优良性状的育种方法

权利要求书

1.一种保持克氏原螯虾优良性状的育种方法，其特征是：包括以下选育步骤：

(1)亲本的选择和培育：选择30个克氏原螯虾家系，每个家系的个体数为1000-3000尾2-3月龄克氏原螯虾幼虾，分别测量体长体重，挑选出具有明显生长优势的克氏原螯虾，每个家系挑选出克氏原螯虾雌虾和雄虾各1尾作为备选亲本。选育出雄虾和雌虾做好PIT标记，养殖在养殖池内，水温保持在20-25摄氏度，不间断充气，培育期间投喂饲料和鱼块，每天投喂三次，投喂量为20分钟食尽即可。

(2)建立家系：待克氏原螯虾性成熟后，利用微卫星标记技术计算被挑选出来的每个雌虾和雄虾之间的亲缘关系。选择亲缘关系较远的雌虾和雄虾建立20-30个家系进行克氏原螯虾人工繁殖。

(3)孵化和育苗：将产生的子一代克氏原螯虾进行人工孵化。每个家系单独放置在一个养殖池内，同等条件下饲养，水温保持在20-25摄氏度，不间断充气，培育期间投喂饲料和鱼块，每天投喂三次，投喂量为20分钟食尽即可。

(4)克氏原螯虾的选育：所有的子一代克氏原螯虾尽量保证处于相同生活环境，待养殖一年后，测量每个家系所有克氏原螯虾的体长和体重，挑选出具有明显生长优势的克氏原螯虾，每个家系挑选一条克氏原螯虾雌虾和雄虾作为亲本。

(5)重新建立家系：把选择出的克氏原螯虾做好重新PIT标记，养殖在环境适宜的养殖池内，水温保持在20-25摄氏度，不间断充气，培育期间投喂饲料和鱼块，每天投喂三次，投喂量为20分钟食尽即可。待克氏原螯虾性成熟后，利用微卫星标记技术计算被挑选出来的每个雌虾和雄虾之间的亲缘关系。选择亲缘关系较远的雌虾和雄虾建立20-30个家系进行克氏原螯虾人工繁殖。按照上述方法经过3-5代连续选育，即可获得优良性状稳定的克氏原螯虾。

2.根据权利要求1所述的一种保持克氏原螯虾优良性状的育种方法，其特征在于：所述的微卫星标记技术所用的10个微卫星引物指标参数如下：

3.根据权利要求1所述的一种保持克氏原螯虾优良性状的育种方法，其特征在于：利用微卫星标记技术计算挑选出来的每个雌虾和雄虾之间的亲缘关系的步骤为：取克氏原螯虾组织样品；提取克氏原螯虾样品DNA；利用权力要求2所示的微卫星位点对克氏原螯虾样品进行PCR扩增；把PCR扩增产物在12％的聚丙烯酰胺胶上进行电泳分离；根据分离结果统计PCR扩增产物的基因型；根据各个个体的基因分型结果利用NTsys软件计算挑选出来的每个雌虾和雄虾之间的亲缘关系。

4.根据权利要求3所述的PCR反应体系是15ul：10×PCR Buffer 1.5ul，2.5mmol/LdNTP 0.5ul，MgCl2 1.5ul，上下游引物各0.5ul，Taq酶0.3ul，DNA模板2ul，超纯水8.2ul。所述的PCR反应程序为：95℃预变性3min；95℃变性30s，退火温度复性30s，72℃延伸30s，30个循环；72℃延伸10min；4℃保存。