[发明专利]一种分离三种虾青素光学异构体的HPLC方法及在食品领域的应用

说明书

本发明公开了一种分离三种虾青素光学异构体的HPLC方法及在食品领域的应用，三种虾青素光学异构体分别为左旋型SS虾青素、右旋型RR虾青素和内消旋型SR虾青素，色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶填料的色谱柱，流动相为添加L‑(+)‑酒石酸二甲酯的甲醇‑四氢呋喃‑水溶液。本发明提供的方法可以有效将三种虾青素光学异构体分离开，且两两达到基线分离；该HPLC方法为手性流动相HPLC法，使用常规的C18色谱柱即可分析，色谱柱成本非常低，可以节约检测成本，降低样品前处理要求。该方法可以用于食品领域中左旋型SS虾青素、右旋型RR虾青素和内消旋型SR虾青素的独立测定。

技术领域

本发明属于食品检测领域，具体涉及一种分离三种虾青素光学异构体的HPLC方法及在食品领域的应用。

背景技术

虾青素是一种天然的类胡萝卜素，化学名称为3,3’-二羟基-β,β-胡萝卜素-4,4’-二酮，分子式为C₄₀H₅₂O₄，相对分子质量为596.86，广泛存在于海洋动植物体内，如虾、蟹、野生三文鱼、微藻等。它是由4个异戊二烯单位以共轭双键形式连接，其2个手性中心分别位于两端环结构中的C-3和C-3’处，并都能以右旋R或左旋S的形式存在，产生3种光学异构体：左旋型SS虾青素、右旋型RR虾青素和内消旋型SR虾青素(文献：高效液相色谱手性拆分法分析生物体内虾青素光学异构体，食品科学2015年)。

三种虾青素光学异构体的化学结构式如下。

目前主要通过手性固定相HPLC法分离三种虾青素(文献：高效液相色谱手性拆分法分析生物体内虾青素光学异构体，食品科学2015年；Reproducibility of theseparation of astaxanthin stereoisomers on Pirkle covalent L-leucine and d-phenylglycine columns.Journal of ChromatographyA,1999；Enantioselectiveseparation of all-E-astaxanthin and itsdetermination in microbialsources.Journal of Chromatography A,2007)。

但是，上述HPLC方法必须依赖于手性色谱柱。本领域技术人员知道，手性色谱柱成本高昂，且使用寿命短，且对样品的纯度要求较高，使用手性色谱柱分离食品中的三种虾青素无疑增加了测定成本，提高了对样品前处理的要求。

手性流动相HPLC法是一种基于普通的C18色谱柱但在流动相中添加手性添加剂对手性化合物进行分离的HPLC方法。该方法的优点是使用常规的C18色谱柱即可分析，色谱柱成本非常低；缺点是发展还很不成熟，且没有系统的理论，适用的化合物非常有限。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种分离三种虾青素光学异构体的HPLC方法及在食品领域的应用，该HPLC方法为手性流动相HPLC法，使用常规的C18色谱柱即可分析，色谱柱成本非常低，从而节约检测成本，降低样品前处理要求。

本发明上述目的通过如下技术方案实现：

一种分离三种虾青素光学异构体的HPLC方法，三种虾青素光学异构体分别为左旋型SS虾青素、右旋型RR虾青素和内消旋型SR虾青素，色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶填料的色谱柱，流动相为添加L-(+)-酒石酸二甲酯的甲醇-四氢呋喃-水溶液。

优选地，流动相包括A相和B相；A相甲醇-四氢呋喃-水溶液由甲醇、四氢呋喃和水按照体积比23:7:70混合而成，含有30mg/L的L-(+)-酒石酸二甲酯；B相甲醇-四氢呋喃-水溶液由甲醇、四氢呋喃和水按照体积比55:15:30混合而成，含30mg/L的L-(+)-酒石酸二甲酯。

优选地，包括如下色谱参数：