[发明专利]一种乙型肝炎病毒核酸提取试剂及其提取方法

说明书

本发明公开了一种乙型肝炎病毒核酸提取试剂及其提取方法。所述提取试剂包含以下重量份的原料：试剂A 20‑40份、试剂B 15‑30份、试剂C 15‑30份、试剂D 50‑80份和磁性纳米颗粒；试剂A包括以下原料：Tris、EDTA、NP‑40、氯化钠、3‑羟基丙磺酸、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、异硫氰酸胍、β‑巯基乙醇，水；试剂B包括以下原料：盐酸胍、水饱和酚、硫酸铵、木糖醇、吡咯烷酮、异丁醇；试剂C包括以下原料：二甲基甲酰胺和丙醇二酸；试剂D为无水乙醇；磁性纳米颗粒为纳米氧化铁。本发明能在不使用蛋白酶K及carrierRNA的情况下进行常温提取低浓度游离核酸，具有操作简便、提高提取效率和提取纯度的优点。

技术领域

本发明涉及基因技术领域，具体是一种乙型肝炎病毒核酸提取试剂及其提取方法。

背景技术

在临床乙型肝炎病毒(HepatitisBVirus，HBV)核酸定量检测中，HBVDNA提取是首先进行的第一步操作。目前核酸提取方法主要有酚氯仿抽提、离心柱法和磁珠法。酚氯仿抽提因大量使用有毒溶剂，对操作者毒性较大，且难于实现自动化操作。离心柱法因其游离核酸提取效率低、成本高，且需要高速离心机，也难于实现自动化，均不能广泛适用于大规模的临床检测。近年发展起来的磁珠法提取核酸技术，其采用超顺磁性纳米颗粒，利用在高盐低pH下吸附核酸，然后在低盐高pH下分离核酸的原理进行样本核酸的分离纯化，因其只需要在磁场作用下就能将核酸分离纯化出来，故其能实现高通量自动化标准化操作。而目前市场上的基于磁珠法的商品化试剂操作过于复杂，并且需要一定温度下使用蛋白酶K及carrierRNA进行孵育，同时需要多步洗涤等步骤，导致提取效率低。

发明内容

本发明的目的在于提供一种乙型肝炎病毒核酸提取试剂及其提取方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种乙型肝炎病毒核酸提取试剂，所述提取试剂包含以下重量份的原料：试剂A20-40份、试剂B 15-30份、试剂C 15-30份、试剂D 50-80份和磁性纳米颗粒；试剂A包括以下重量份的原料：Tris7-16份、EDTA5-10份、NP-40 5-8份、氯化钠1-3份、3-羟基丙磺酸6-11份、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠2-5份、异硫氰酸胍6-11份、β-巯基乙醇5-8份，水15-25份；试剂B包括以下重量份的原料：盐酸胍5-11份、水饱和酚3-5份、硫酸铵5-7份、木糖醇1-3份、吡咯烷酮2-5份、异丁醇1-5份；试剂C包括以下重量份的原料：二甲基甲酰胺8-15份和丙醇二酸6-13份；试剂D为无水乙醇；磁性纳米颗粒为纳米氧化铁。

作为本发明进一步的方案：所述提取试剂包含以下重量份的原料：试剂A 35份、试剂B 22份、试剂C 24份和试剂D 72份。

作为本发明进一步的方案：试剂A包括以下重量份的原料：Tris 12份、EDTA 8份、NP-40 7份、氯化钠2份、3-羟基丙磺酸8份、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠4份、异硫氰酸胍10份、β-巯基乙醇6份，水20份。

作为本发明进一步的方案：试剂B包括以下重量份的原料：盐酸胍9份、水饱和酚4份、硫酸铵6份、木糖醇2份、吡咯烷酮4份、异丁醇3份。

作为本发明进一步的方案：试剂C包括以下重量份的原料：二甲基甲酰胺12份和丙醇二酸11份。

一种乙型肝炎病毒核酸提取试剂的提取方法，包括以下步骤：(1)将试剂A、试剂B、试剂C和试剂D混合均匀，得到混合液，备用；(2)于100ul样本中加入200ul上述混合液，然后再加入25ul磁性纳米颗粒，混合后进行第一次磁分离处理，弃去第一次磁分离处理后的上清液，然后进行第二次磁分离处理，弃去第二次磁分离处理后的上清液，然后进行第三次磁分离处理，取第三次磁分离处理后的上清液，即得乙型肝炎病毒核酸。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：