[发明专利]一种降低-80℃冻存对CIK细胞杀伤肿瘤活性的方法在审
| 申请号： | 201810350301.5 | 申请日： | 2018-04-18 |
| 公开（公告）号： | CN108522496A | 公开（公告）日： | 2018-09-14 |
| 发明（设计）人： | 沈兵 | 申请（专利权）人： | 沈兵 |
| 主分类号： | A01N1/02 | 分类号： | A01N1/02 |
| 代理公司： | 南京汇盛专利商标事务所(普通合伙) 32238 | 代理人： | 赵超 |
| 地址： | 215006 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 冻存 杀伤肿瘤活性 肿瘤细胞 蔓荆子 二萜 藿香 预处理 表达水平 发现 | ||
【权利要求书】：
1.一种降低-80℃冻存对CIK细胞杀伤肿瘤活性的方法，冻存前先用hsa-miR-543抑制剂预处理，所述hsa-miR-543抑制剂为蔓荆子二萜D或蔓荆子二萜E。
2.一种-80℃冻存CIK细胞的方法，其特征在于：取培养中的CIK细胞，于冻存前一定时间在培养基中添加有效浓度的hsa-miR-543抑制剂蔓荆子二萜D或蔓荆子二萜E，培养一定时间后，离心弃上清液，加入冻存液，调整细胞浓度至合适浓度，梯度降温至-80℃冻存。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：于冻存前8h在培养基中添加有效浓度的hsa-miR-543抑制剂蔓荆子二萜D或蔓荆子二萜E，培养8h后，离心弃上清液。
4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于：蔓荆子二萜D或蔓荆子二萜E浓度为10μM。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：冻存液由RPMI 1640培养基、自体血浆和二甲基亚砜按照体积比5:4:1混合而成。
6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：调整细胞浓度至2×107/ml。
7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，梯度降温方法为：首先于4℃冰箱中放置1h，然后-20℃冰箱中放置2h，转至-80℃低温冰箱放置。
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