[发明专利]一种紫花三叉白及种子组织培养方法

说明书

本发明提供一种紫花三叉白及种子组织培养方法，属于白及组织培养领域。所提供的一种紫花三叉白及种子组织培养方法按留种、蒴果选择、蒴果处理、无菌播种、种子萌发及从生芽的诱导增殖、生根壮苗、炼苗、出瓶洗苗、消毒步骤进行组织培养育苗。本发明提高了紫花三叉白及种子组织培养种苗的球茎、叶片大小，叶片基部更加粗壮，提高了白及的种植成活率。

技术领域

本发明属于白及组织培养领域，具体涉及一种紫花三叉白及种子组织培养方法。

背景技术

白及为兰科白及属多年生草本植物，植株高18-60cm；假鳞茎扁球形，上面具荸荠似的环带，富粘性；茎粗壮，劲直。白及常野生于丘陵、低山溪边以及阴蔽草丛或者林下湿地，分布于我国秦岭以南省区以及日本等地；以块茎入药，具有补肺止血、消肿生肌等功效，同时也广泛应用于医药、美容、涂料和印染等行业。实际生产中，人工白及栽培长期处于“就地采收—就地留种—就地再栽培”的原始循环状态，白及品质逐年退化；在开发种源培植方面，白及组培苗死亡率高的不足以及无效苗现象的存在对利用组培苗缓解白及大规模产业化种植产生了一定制约。紫花三叉白及是一种花色为紫色、外观形态为三叉的大白及品种，现有的紫花三叉白及组织培养方法培养出来的白及瓶苗球茎及叶片较小，后期生长缓慢，成活率低。

发明内容

本发明的目的是解决上述不足，提供一种紫花三叉白及种子组织培养方法。

为实现上述目的，本发明的技术解决方案是：一种紫花三叉白及种子组织培养方法，其特征在于按如下步骤进行：

第一步，留种：选择生长健壮的植株，且在直径1Km内无其它种类紫花三叉白芨母株，在花期，自然授粉，蒴果开始转黄时，选择成熟饱满的蒴果采收。

第二步，蒴果选择：选择成熟饱满、无病虫害、无机械损伤、无自然开裂的蒴果。

第三步，蒴果处理：先把蒴果两端进行处理，用剪刀把果柄修短至1cm，末端黑色的包裹物轻轻除去，但要保证蒴果完整、不开裂；再用生活饮用水小流水清洗表面的灰尘约1小时，晾干表面的水份，用洁净纸进行包裹；处理后的蒴果用75%酒精浸泡30秒，再用无菌水清洗2～3遍，再用0.1%浓度的升汞浸泡30min，再用无菌水清洗4～5遍，后在酒精灯火焰上灼烧1S～2S，备用。

第四步，无菌播种：在无菌条件下，用镊子夹住消毒处理过的蒴果果柄，用解剖刀切开蒴果顶端，将蒴果置于培养瓶内轻轻的抖动，均匀撒播一层种子于MS培养基表面，立即封住瓶口。

第五步，种子萌发及从生芽的诱导增殖：播种的培养瓶置于温度为23℃～27℃的洁净环境中，在光照时长为8小时/天、光照强度为2000lux～3000lux条件下培养一周后，再在光照时长为10小时/天的条件下，继续培养35～45天形成原球茎及从生芽。

第六步，生根壮苗：培养瓶在注入95～115ml专有培养基后进行高温杀菌；杀菌后选择芽体健康、无污染、长出两片小叶、芽高0.8～1.2cm的丛生芽放置在注有专有培养基的培养瓶中培养，进行生根壮苗；培养环境的光照强度为2000lux～3000lux，光照时长为10小时/天，培养120天～135天，温度为23℃～27℃。

第七步，炼苗：种苗在温度15℃～35℃、光照2000lux～20000lux范围条件下锻炼15天～20天后，以种苗叶片、种球变深绿即可出瓶。

第八步，出瓶洗苗：打开瓶口，用镊子将经过炼苗后的种苗轻轻夹出，用流动的水下进行清洗，洗净根部附着的培养基。

第九步，消毒：将清洗好的种苗用广谱性杀菌剂稀释喷雾或浸泡 5s～10s；种苗处理后置于阴凉地方平摊存放并及时进行移植。

所述的专用培养基配置方法按重量组分：MS培养基为1000份、6BA为0.5～1.5份、NAA为0.5～1.5份、炭粉为0.5份、香蕉为50份混合，再加入NaOH调节PH值为5.8。