[发明专利]一种快速高效的PPCs细胞培养方法

权利要求书

1.一种快速高效的PPCs细胞培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：使用明胶稀释液过夜包被培养容器；

步骤2：分离单个核细胞，然后洗涤、离心和重悬后分装备用；分离单个核细胞的洗涤和重悬过程，使用成纤维细胞的细胞上清液进行，优选使用成纤维细胞培养3天后的细胞上清液；

步骤3：将所述步骤1处理的培养容器内的多余明胶吸除，并将步骤2中获得的单个核细胞接种到培养容器中，放置于氧浓度为0.5％-7％的细胞培养箱中培养，从接种时间开始计时，间隔固定时间更换新鲜的细胞培养基，培养一定时间后收集细胞。

2.根据权利要求1所述的一种快速高效的PPCs细胞培养方法，其特征在于，培养细胞的细胞培养基中一半体积为基础培养基，另一半体积为成纤维细胞的细胞上清液。

3.根据权利要求2所述的一种快速高效的PPCs细胞培养方法，其特征在于，所述的基础培养基为添加了5-12％knockout血清替代品、0.5％双抗、0.007ul/ml b-巯基乙醇、10ng/ml SCF以及100U/ml IL-3的DMEM/F12培养基。

4.根据权利要求2所述的一种快速高效的PPCs细胞培养方法，其特征在于，所述的成纤维细胞的细胞上清液为成纤维细胞培养3天后的上清液用0.22μm滤膜过滤后获得。

5.根据权利要求1所述的一种快速高效的PPCs细胞培养方法，其特征在于，所述的培养容器为细胞培养瓶或细胞培养板。

6.根据权利要求1所述的一种快速高效的PPCs细胞培养方法，其特征在于，所述步骤2中采集的单个核细胞用0.01M PBS洗涤3次后，在200g转速下离心10分钟，然后洗涤、离心和重悬后分装备用。

7.根据权利要求1所述的一种快速高效的PPCs细胞培养方法，其特征在于，所述的培养容器为T75细胞培养瓶，每个T75细胞培养瓶使用3ml的0.1％的明胶稀释液包被。

8.根据权利要求1-7任意一项所述方法培养得到的PPCs细胞。

9.根据权利要求8所述的PPCs细胞在制备抗衰老药物中的应用。