[发明专利]猪瘟病毒单克隆抗体HK 44及医用用途

说明书

本发明提供了一种猪瘟病毒单克隆抗体HK 44，能与猪瘟病毒E2蛋白特异性地结合,并且能够十分有效地阻断病毒对细胞的侵入,对细胞有明显的保护作用。可用于针对抗猪瘟病毒的生物制剂的研发，以及猪瘟病毒检测的相关研究。

技术领域

本发明属于生物技术和分子免疫学领域，涉及一种能有效抗猪瘟病毒抗体HK 44及其相应序列。具体为抗猪瘟病毒E2蛋白的抗体及医用用途。

技术背景

猪瘟（Classical swine fever, CSF）是由猪瘟病毒（Classical swine fevervirus, CSFV）感染引起猪的一种烈性传染病，被世界动物卫生组织（OIE）列为须申报的动物传染病目录，具有急性、热性、高度接触性等特点。在危害我国养猪业的疾病和疫情中，猪瘟是具有代表性的重大疫病。

猪瘟病毒结构蛋白主要包括C蛋白和E2（gp55），囊膜糖蛋白Erns（gp44/48）和E1（gp33）蛋白。位于病毒粒子表面的E2 为囊膜糖蛋白，是在CSFV中起保护作用的抗原蛋白，主要存在形式为同源二聚体E2-E2 或异源E1-E2 二聚体，能够使宿主的免疫系统激活，产生中和抗体，是与宿主相互作用的主要靶点。在CSFV 病毒粒子的表面，E2 蛋白被认为是有可能作为的受体结合的主要蛋白之一。

抗体（Antibody）,也叫免疫球蛋白 (Ig),是一种能特异性结合抗原的蛋白,由B细胞接受抗原刺激后增殖分化为浆细胞产生，是介导体液免疫的重要免疫分子。作为抵御清除机体内外来病原微生物的主要应答分子，其在疾病的免疫预防、诊断和治疗等方面有着重要的使用价值。由于其作用的特异性、高效性，已广泛应用于抗病毒等方面的研究。

本发明针对猪瘟病毒E2蛋白，提供了一种具有中和活性的猪瘟病毒特异性单克隆抗体，为猪瘟病毒血清学的快速诊断，开发猪瘟新型疫苗及猪瘟的防治提供了候选者。

发明内容

本发明提供了一种能够结合猪瘟病毒E2蛋白，并且有效中和猪瘟病的抗体HK44及其序列。

本发明所述的一种猪瘟病毒单克隆抗体HK44，包括轻链和重链，其特征在于：

所述单克隆抗体的重链全长氨基酸序列为SEQ ID 1，可变区氨基酸序列为序列表中的SEQ ID 3；

所述单克隆抗体的轻链全长氨基酸序列为SEQ ID 5，可变区氨基酸序列为序列表中的SEQ ID 7；

所述的猪瘟病毒单克隆抗体HK44，其特征在于：

能够编码抗体重链全长核酸序列为SEQ ID 2；所述抗体的重链可变区包含核苷酸序列为SEQ ID 4；

能够编码抗体轻链全长核酸序列为SEQ ID 6；所述抗体的轻链可变区包含核苷酸序列为SEQ ID 8。

所述单克隆抗体或其抗原结合片段选自Fab、Fab’、F (ab’)₂、Fd、Fv、Fc、dAb、互补决定区片段、单链抗体。

所述的单克隆抗体包括非CDR区，且所述非CDR区来自不是猪类的物种。

所述的猪瘟病毒单克隆抗体HK44在诊断或检测猪瘟病毒试剂中的用途。

所述的猪瘟病毒单克隆抗体HK44在预防治疗猪瘟生物制剂中的用途。

本发明猪瘟病毒单克隆抗体HK44的制备方法，包括以下步骤：

在猪21-30日龄和65日龄时分别注射1次猪瘟疫苗，间隔一周后加强免疫一次，共免疫三次。用猪瘟病毒抗体检测试剂盒检测免疫后猪血清中抗体含量，选择抗体含量较高的实验猪，前腔静脉采血获得血样，之后使用淋巴细胞分离液对血样进行密度梯度离心，分离出猪淋巴细胞；