[发明专利]一种检测呕吐毒素及其乙酰化衍生物的时间分辨荧光免疫层析卡

说明书

一种检测呕吐毒素及其乙酰化衍生物的时间分辨荧光免疫层析卡，属于免疫层析和食品安全检测领域。本层析卡由样品垫、标记垫、硝酸纤维素膜、吸水滤纸和PVC底板组成。标记垫固定有纳米铕荧光微球标记的呕吐毒素单克隆抗体1和抗体2。抗体1对呕吐毒素和15‑乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇有高度特异性；抗体2对呕吐毒素和3‑乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇有高度特异性。本发明基于抗原抗体免疫学原理进行检测。本层析卡与便携式时间分辨荧光免疫分析仪联用，用于谷物及其制品中呕吐毒素及其乙酰化衍生物总量的快速定量检测，灵敏度高、稳定性好；检出限0.168 mg/kg，检测范围0.17～5 mg/kg，时间10～15min，操作简便，不需专业培训，广泛适用于各种场合和不同层次人员的需要。

技术领域

本发明涉及一种检测呕吐毒素及其乙酰化衍生物总量的时间分辨荧光免疫层析卡，具体涉及其制备方法和应用于快速检测的方法，属于免疫层析技术领域和食品安全检测领域。

背景技术

呕吐毒素又称脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol，DON，以下用英文简写），属单端孢霉烯族化合物，化学名称为3α,7α,15-三羟基草镰孢菌-9-烯-8-酮，其结构为四环的倍半萜，分子式为C₁₅H₂₀O₆，分子量296.3。呕吐毒素主要有两种乙酰化的衍生物，分别为3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇(3-Ac-DON，以下用英文简写)和15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇( 15-Ac-DON，以下用英文简写)；现有测定数据表明，这两种乙酰化衍生物大约占谷物中总DON量的10％左右。

呕吐毒素及其乙酰化衍生物，主要由镰刀菌属Fusarium的几个种产生，尤其是禾谷镰刀菌（Fusarium graminearum）和黄色镰刀菌（Fusarium culmorum）。小麦、大麦、玉米等谷类作物，当生长或贮藏于潮湿高温环境条件时，极易受此类菌的侵染，导致毒素剧增。

DON及其乙酰化衍生物的性质稳定，耐热、耐压、耐弱酸、耐储藏，一般的食品加工不能破坏其结构。人和动物在误食被此类毒素污染的食物后，会产生呕吐、厌食、腹泻、发烧、站立不稳、反应迟钝、免疫抑制和血液病等毒性反应。近年来发现DON及其衍生物可能与人类食管癌、IgA肾病有关，有明显细胞毒性、胚胎毒性和一定致畸作用，并可能有遗传毒性。最新的动物研究表明，DON 及其衍生物可以和其他真菌毒素产生联合作用，加剧动物肝、肾脏细胞膜损伤和氧化损伤，导致动物过早死亡。

DON已被联合国粮农组织（FAO）和世界卫生组织（WHO）确定为最危险的自然发生食品污染物之一；在1998年国际癌症研究机构公布的评价报告中，被列为三类致癌物。国际食品添加剂联合专家委员会（JECFA）认为，两种乙酰衍生物3-Ac-DON和15-Ac-DON的毒性与DON 相当，在生物体消化系统内可通过乙酰化基团的水解，转化为DON而诱导毒性，因此于2010年对DON及其乙酰衍生物总和的每日容许最大摄入量确定为1.0μg/kg/d。欧盟正在考虑将目前执行的单一DON限量标准修订为DON及其衍生物（包括隐蔽型）之和。因此跟踪国际新标准，将我国现行食品中针对DON单一限量修订为DON及其衍生物之和为大势所趋。需特别指出的是，我国于2014年国家食品安全风险监测计划中，已明确要求检测小麦粉、燕麦（含燕麦片）、婴幼儿谷物类辅助食品中的DON、3-Ac-DON和15-Ac-DON三种化合物。

国家标准GB5009.111-2016中规定了采用同位素稀释液相色谱-串联质谱法测定谷物及食品中DON、3-Ac-DON和15-Ac-DON的含量。国家出入境检验检疫行业标准SN/T3137-2012中规定了采用液相色谱-质谱/质谱法检测出口食品中DON、3-Ac-DON和15-Ac-DON的含量。色谱法具有准确度、精密度和灵敏度高的优点，但仪器昂贵、样品前处理复杂、成本高、不能现场操作，对操作人员要求高。