[发明专利]罗汉果提取物Mogroside V在促卵母细胞体外成熟方面的应用

说明书

本发明公开了罗汉果提取物Mogroside V具有良好的促卵母细胞体外成熟的作用。据此，发明人还建立了相对完善的培养体系——培养液和培养方法。该培养液是以常规培养液为基础添加罗汉果提取物Mogroside V。研究表明，使用该培养液可以显著地提高猪卵子体外成熟质量，卵母细胞体外成熟率从79.4％提高到87.4％，并且对卵子发育潜能具有促进作用。因此，本发明极大地提高了卵母细胞体外成熟率，解决了目前成熟效率低、培养周期长、不利于大规模生产的问题，采用本发明能为体细胞核移植、体外受精、体细胞克隆提供更多的优质卵母细胞。

技术领域

本发明属于动物卵母细胞体外培养领域，尤其涉及一种罗汉果提取物MogrosideV在促卵母细胞体外成熟方面的应用。

背景技术

卵母细胞体外成熟是用于体外受精、克隆保种及转基因动物生产的一项重要技术，猪卵母细胞质量对体外受精及激活后胚胎发育影响重大。近几十年，国内外猪卵母细胞体外培养技术有了长足发展，但是成熟卵母细胞体外发育能力较体内卵母细胞仍然低很多，这使得克隆效率以及体外受精效率受限制于优质卵母细胞的缺乏。近年来，猪卵母细胞体外成熟技术有较大的进步，如中国专利“一种简单、经济、高效的猪卵母细胞体外成熟方法”(专利号200910185795.7，公开日2010-05-19)和中国专利申请“一种提高猪卵母细胞体外成熟率的培养液及其应用”(专利申请号201710305057.6，公开日2017-08-29)。

卵母细胞体外成熟受许多因素影响，卵子种类、培养条件和培养液成分，其中培养液成分直接影响卵母细胞发育。卵母细胞成熟过程中，培养环境对卵母细胞产生重要影响，例如氧化应激和脂滴含量，细胞内活性氧自由基离子产生过多，氧化应激水平变化使卵母细胞发育异常，因此维持卵母细胞氧化应激水平对卵母细胞体外成熟尤其重要。脂滴大量分布在卵母细胞胞质中，由脂肪酶分解成不同长度的脂肪酸，进入线粒体进行β氧化，维持卵母细胞形态和正常发育。

Mogroside V提取自中国广西特种植物罗汉果，属于皂甙的一种，较蔗糖甜度高。近几年来科学家对罗汉果的研究逐渐深入，罗汉果作为饮品置于茶叶中，其提取物具有抗氧化、抗炎、抗癌的作用。最近有研究报道，20μM的罗汉果皂甙mogrol可促进脂肪组织中脂肪的分解，降低脂滴密度。罗汉果提取物的主要成分mogroside V可降低细胞中氧化应激的水平，促进细胞的生长。然而，这些只是一些机制研究以及细胞中的研究状况，对于mogroside V能否促进减数分裂，提高卵母细胞发育效率，并用于孤雌激活尚无报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种罗汉果提取物Mogroside V在促卵母细胞体外成熟方面的应用。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

罗汉果提取物Mogroside V在促卵母细胞体外成熟方面的应用。

卵母细胞为猪卵母细胞。

猪卵母细胞所处的未成熟时期为germinal vesicle期。

提高猪卵母细胞体外成熟率的培养液，含有罗汉果提取物Mogroside V。

上述培养液，以常规培养液为基础添加罗汉果提取物Mogroside V。

上述培养液，以常规培养液为基础添加罗汉果提取物Mogroside V(罗汉果甜苷V)，PVA(聚乙烯醇)，D-glucose(葡萄糖)，Sodiumpyruvate(丙酮酸钠)，Cysteine(半胱氨酸)，Penicillin G(青霉素钾)，Streptomycin(链霉素)，EGF(表皮生长因子)，PFF(猪卵泡液)，follicle-stimulating hormone(促卵泡素FSH)和luteinizing hormone(促黄体素LH)。