[发明专利]一种芍药离体再生体系建立方法

权利要求书

1.一种芍药离体再生体系建立方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：外植体获得-愈伤组织制备-不定芽分化-继代增殖-根诱导-炼苗-移栽。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法的具体步骤如下：

（1）外植体的获得：3月下旬至4月初选取幼嫩的芍药叶片，用清水冲洗干净，然后用洗涤剂漂洗一次，摇床上振荡15-20min；流水冲洗3min后，于无菌操作台上用75％乙醇消毒10-20s，立即倒入0.1％的升汞，最后用无菌水洗涤2次，将消毒完毕的叶片切割为2cm长的小段；

（2）愈伤组织制备：取步骤（1）中处理得到的外植体小段，接种于诱导培养基中进行愈伤组织的诱导，首先暗培养7-10d，然后进行光照培养25d；所述光照培养条件为：光照时间为14h/d，光照强度为1500lx；所述诱导培养基为MS+蔗糖30g/L+KT 1mg/L+IBA 0.02mg/L；

（3）不定芽分化：将步骤（2）中诱导得到的愈伤组织，在外植体上切下，接入分化培养基进行不定芽分化，光照时间14h/d，光照强度2500lx；所述分化培养基为1/2MS+NAA0.6mg/L+CPPU 0.3mg/L；

（4）继代培养：将诱导得到的不定芽切割后，接入含有继代增殖培养基的试管中进行继代培养25d，所述继代增殖培养基为1/2MS＋NAA0.5mg/L；

（5）根诱导：将步骤（4）中继代增殖得到的试管苗接入含有生根培养基的瓶中进行生根培养，所述生根培养基为1/2MS+ IBA 2.0mg/L；待不定根长满瓶底，植株整体生长稳健时，准备移苗出瓶；

(6) 炼苗：将培养瓶的瓶盖打开，炼苗2-3天，然后将根浸泡在生根制剂中，15min；

（7）移栽。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，诱导培养基、分化培养基、继代增殖培养基、生根培养基pH值为5.4-6.0。

4.根据权利要求2-3所述的方法，其特征在于所述生根制剂为微生物促生根剂，其组成包括：

淡紫灰链霉菌、解淀粉芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、萘乙酸钠、活性炭、蔗糖。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在所述生根制剂的具体组成为：

淡紫灰链霉菌发酵液：解淀粉芽孢杆发酵液：短小芽孢杆菌发酵液：萘乙酸钠：活性炭；蔗糖的重量比为3:1:3:1:1:2。

6.根据权利要求4-5所述的方法，其特征在于：

所述淡紫灰链霉菌为CGMCC NO.2130；

所述解淀粉芽孢杆菌为ATCC23843；

所述短小芽孢杆菌为ATCC7061。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述生根制剂制备方法为：首先将淡紫灰链霉菌、解淀粉芽孢杆、短小芽孢杆菌按照常规方式活化，然后培养至活菌数为10⁷个/克的发酵液，将上述发酵液按照质量比例3:1:3混合，按照重量配比添加萘乙酸钠、活性炭、蔗糖即得。

8.根据权利要求1-7所述方法，其特征在于，所述芍药为杭白芍品种。

9.权利要求1-8所述方法用于获得芍药离体再生体系的用途。

10.权利要求1-9所述方法获得的杭白芍外植体。