[发明专利]低温乙醇两步法分离的人血白蛋白

说明书

本发明提供了一种两步低温乙醇法分离法生产的人血白蛋白，其特征在于人血白蛋白的低温乙醇分离工艺中没有组分Ⅳ沉淀的分离步骤，组分I+Ⅱ+Ⅲ沉淀后直接分离组分V沉淀，通过超滤保留超滤滤过液的方法超滤除去大分子的杂蛋白，然后是对人血白蛋白超滤除去小分子的蛋白及残留乙醇、可能的铝离子。采用该工艺后的人血白蛋白产品的特点是，生产过程的管理严格执符合GMP要求，不存在返工或再加工生产，并且有较高的人血白蛋白产品得率，在现有基础上每1吨血浆的人血白蛋白产品生产得率提高12%。

技术领域

本专利属于生物制药领域，提供了一种高收率的两步低温乙醇分离的人血白蛋白产品。

背景技术

《药品生产质量规范》（2010年修订）对于药品生产过程中潜在的回收加工或者重新加工的要求有如下两条：

第一百三十三条 产品回收需经预先批准，并对相关的质量风险进行充分评估，根据评估结论决定是否回收。回收应当按照预定的操作规程进行，并有相应记录。回收处理后的产品应当按照回收处理中最早批次产品的生产日期确定有效期。

第一百三十四条 制剂产品不得进行重新加工。不合格的制剂中间产品、待包装产品和成品一般不得进行返工。只有不影响产品质量、符合相应质量标准，且根据预定、经批准的操作规程以及对相关风险充分评估后，才允许返工处理。返工应当有相应记录。

人血白蛋白是血液制品行业的主要产品，占血液中总蛋白质含量的50～60%，分子量66000，不含糖。目前血液制品的生产工艺绝大部分是低温乙醇工艺，低温乙醇法生产人血白蛋白工艺的分离顺序是：以健康人血浆为原料，分离组分I+Ⅱ+Ⅲ沉淀，分离组分Ⅳ沉淀（有的工艺中该步骤又分为两步），分离组分V沉淀，精制纯化得到人血白蛋白，后进行一个超滤步骤操作9遍。该工艺中组分Ⅳ沉淀基本是没有得到具体产品，关键的是该步骤的白蛋白共沉淀最多，达到20%以上。所以有了诸多研究从组分Ⅳ沉淀中回收组分V沉淀然后制造人血白蛋白，比如：

广东卫伦生物制药有限公司于2010年01月19体申请的专利：回收Cohn氏组分Ⅳ沉淀中白蛋白的方法（申请号：201010101816.5）公开了一种从Cohn氏组分Ⅳ沉淀中回收白蛋白的方法,通过选择pH值、乙醇浓度、酸碱度和温度,使组分Ⅳ沉淀中的白蛋白与其它蛋白充分分离,每公斤组分Ⅳ沉淀可制得白蛋白110～120克,使血浆中白蛋白的总提取率提高到93%以上。

同路生物制药股份有限公司于2012年08月27日申请的人血白蛋白的制备方法（申请号：201210308161.8）提供了一种人血白蛋白的制备方法，该方法是从人血浆分离的废弃物组分Ⅳ沉淀中提取、纯化出人血白蛋白，从而可以提高血浆的综合利用。本发明包括以下步骤：1、将组分Ⅳ沉淀溶解后压滤分离得到滤液A；2、边搅拌滤液A边加入聚乙二醇，压滤分离，得到滤液B；3、调整滤液B的pH，控制滤液B的温度，压滤分离，得到滤液C；4、边搅拌滤液C边加入聚乙二醇，得到反应液C，压滤分离，得到沉淀；5、沉淀溶解，进行DEAESepharose fast flow弱阴离子交换层析，超滤；6、将超滤液中的蛋白浓度稀释后加入辛酸钠，调整pH至6.8～7.0，除菌过滤、巴氏灭活，得到人血白蛋白成品。

深圳市卫光生物制品股份有限公司于2015年01月05日申请的一种从组分Ⅳ-2沉淀中提取人血白蛋白的方法（申请号：201510003914.8）采用溶解组分Ⅳ-2沉淀、分离组分Ⅳ-1沉淀、分离组分Ⅳ-2沉淀、分离组分V沉淀、组分V沉淀溶解、过滤、超滤透析、浓缩、加温纯化、过滤、超滤透析、浓缩和配制的步骤用来制备人血白蛋白，各步骤前后紧密相连、层层相扣，所生产得到的人血白蛋白半成品，蛋白质含量在20.1％以上，纯度不低于蛋白质总量的98.0％，pH值为6.5～7.3，残余乙醇含量不高于0.025g/100ml。