[发明专利]降解亚硝酸钠的多粘类芽孢杆菌菌株及其筛选和应用

说明书

本发明公开了一种降解亚硝酸钠的多粘类芽孢杆菌菌株及其筛选和应用，该菌Paenibacillus polymyxa JM01保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号CGMCC 15240。本发明包括菌株的分离培养及16S rDNA分子鉴定；多粘类芽孢杆菌培养后，活性物质菌悬液的获得；在体外，该菌株对亚硝酸盐的降解效果；在体内，腌制猪肉中的亚硝酸盐的降解应用。本发明筛选的多粘类芽孢杆菌能对亚硝酸盐进行有效降解，可用于含亚硝酸盐食品中减少亚硝酸盐含量的添加物。

技术领域

本发明属于新菌种筛选技术及微生物技术领域，特别涉及一株能降解亚硝酸 钠的多粘类芽孢杆菌及其在肉制品中的应用。

背景技术

亚硝酸钠是一种普遍应用的食品添加剂，在腌制肉制品中应用由来已久。它 在肉制品中的最大允许添加量是0.15g/kg，最大允许残留量为30mg/kg。亚硝 酸钠残留因能形成亚硝胺而成为一种强烈致癌物质，它在食品中的添加和残留受 到很大的关注。由于亚硝酸钠的残留，加工肉制品被世卫组织下属机构国际癌症 研究机构列为第一类致癌物质。

研究表明，亚硝酸盐在腌制肉的贮存过程中会逐渐减少，有些细菌(比如乳 酸菌)具有降解亚硝酸盐的作用。其作用机制有通过酶降解和酸降解途径。关于 多粘类芽孢杆菌降解亚硝酸钠未见相关报道。本发明主要是将多粘类芽孢杆菌的 不同活性成分作为降解剂，喷洒到腌制猪肉表面，测定其亚硝酸盐降解效果。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种降解亚硝酸钠的多粘类芽孢杆菌菌剂 及其制备方法和具体应用。

本发明公开了一种降解亚硝酸钠的多粘类芽孢杆菌菌株，保藏名称为多粘类 芽孢杆菌JM01(Paenibacillus polymyxa JM01)，保藏于中国微生物菌种保藏 管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号， 保藏号为CGMCC 15240，保藏日期为2018年1月18日。

降解亚硝酸钠的菌株经16S rDNA鉴定，为Paenibacillus polymyxa。所述 菌株的单菌落为圆形、白色、边缘清晰、不透明、表面略褶皱。菌株需氧性试验 结果显示可在培养基中间和表面生长，为兼性好氧菌。如图1和2所示。

本发明以改良MRS培养基为筛选培养基，具体方法为：称取金华火腿样品 加入到装有无菌生理盐水的三角瓶中，振荡均匀制成悬液，吸取适量悬液涂布于 含亚硝酸钠的MRS固体培养基上，30-37℃下培养2-3d，待培养皿中长出菌落 后，挑取单个菌落在改良MRS固体培养基上进行反复分离划线，并连续三代培 养获得遗传稳定性的菌株，即为所述降解亚硝酸钠的多粘类芽孢杆菌属菌株。

所述的降解亚硝酸钠的多粘类芽孢杆菌菌株可以用于制备降解腌制猪肉中 亚硝酸盐的菌剂。

活性成分分别是多粘类芽孢杆菌的发酵培养液、菌悬液和菌体干粉。

含有多粘类芽孢杆菌的菌剂的成分为，每毫升降解菌剂中含有多粘类芽孢杆 菌10⁷-10¹⁰个。

活性成分的制备过程如下：

1)多粘类芽孢杆菌菌种在LB固体培养基上生长，其培养基配方为胰蛋白 胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化钠10g/L、琼脂20g/L，用0.1mol/L的NaOH 调节pH 7.4，在121℃下灭菌20min。

2)挑取1)中适量的多粘类芽孢杆菌加入到含有50mL LB液体培养基的 锥形瓶中(菌株的接种量为1-2％(V/V))，放置在37℃，静置培养12-16h， 然后在超净台稀释6-7倍，每个浓度取150μL菌液涂布到LB固体培养基中。

3)根据2)中测得的菌落数，将多粘类芽孢杆菌的浓度稀释到1×10⁷-1×10¹⁰ CFU/mL，即得到多粘类芽孢杆菌发酵培养液。